裂谷热病毒囊膜蛋白基因DNA免疫的研究

摘要

分别将裂谷热病毒(Rift Valley Fever Virus,RVFV)囊膜糖蛋白GN、GC和G(N+C)基因亚克隆至真核表达载体pCAGGS多克隆位点鸡β-actin转录启动子下游,分别构成pCAGG-RVFV-GN、pCAGG-RVFV-GC和pCAGG-RVFV-G(N+C).免疫沉淀试验结果表明,重组RVFV蛋白GN、GC分别在pCAGG-RVFV-GN、pCAGG-RVFV-G(N+C)转染HeLa细胞中获得表达,并具有良好免疫反应性.pCAGG-RVFV-GN、pCAGG-RVFV-GC和pCAGG-RVFV-G(N+C)质粒DNA混合物按100μg/只剂量肌肉注射免疫6周龄BALB/c小鼠.每隔4周用相同的剂量加强免疫,第二次加强免疫3周后采血、分离血清备用.分别以杆状病毒表达RVFV囊膜蛋白GN、GC制备的抗原液包被ELISA板,间接ELISA检测DNA免疫鼠血清中RVFV囊膜蛋白G(N+C)特异性抗体,具有良好的敏感性和特异性.另外,DNA免疫鼠血清中的特异抗体可有效中和RVFV囊膜蛋白G(N+C)介导的伪型VSV重组病毒侵入RVFV易感宿主细胞的感染性.结果表明,pCAGG-RVFV-GN、pCAGG-RVFV-GC和pCAGG-RVFV-G(N+C)质粒DNA混合物作为DNA疫苗具有防制裂谷热的潜力.