大肠杆菌-链霉菌穿梭表达载体pMF的构建及其应用

摘要

[目的]构建能定点整合到链霉菌(Streptomyces)染色体上的高效表达载体.[方法]以链霉菌自杀型表达载体pLSB2为基础,通过插人链霉菌噬菌体ΦC31整合酶基因int和attP位点(Phage attachment site),构建了能在大肠杆菌和链霉菌之间进行接合转移并定点整合到链霉菌染色体上的表达载体pMF.将pMF转化大肠杆菌ET12567(pUZ8002),并分别接合转移天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor M145)、变铅青链霉菌(Streptomyces lividans TK24)和红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea 2338),挑取接合子进行PCR和Southern杂交检测.将来自刺糖多孢菌S08-4的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(SAM-s)克隆到载体pMF的启动子下游,接合转移到天蓝色链霉菌中.[结果]表明pMF成功整入链霉菌染色体,并且检测到目的蛋白的表达.[结论]构建的pMF载体可作为外源基因定点整合表达的有效工具,为后续的基因功能研究以及链霉菌的遗传改造奠定了基础.