鼠伤寒沙门菌SL1344株环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统的构建及其雏鸡免疫保护试验

摘要

[目的]为构建鼠伤寒沙门菌环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统,并对其生物学特性进行检测.[方法]以鼠伤寒沙门菌SL1344△cya株为亲本株,利用重组自杀性质粒(pRE△asd)介导的同源重组技术,经两步法缺失并筛选asd基因缺失株(SL1344△cya △asd).将含asd基因且无抗性的pYA3493质粒电转化至缺失株SL1344△cya△asd,构建重组菌株SL1344△cya△asd(pYA3493).[结果]试验结果表明,重组菌株SL1344△cya△asd(pYA3493)生化特性和生长速度与参考株SL1344相比差异较大,与亲本株SL1344△cya基本一致,SL1344△cya△asd(pYA3493)失去了利用麦芽糖、乳糖、山梨醇等碳源的能力,也不能分解H2S、半乳糖和鼠李糖,但仍保留了利用葡萄糖的能力.对1日龄雏鸡攻毒试验表明,SL1344△cya△asd(pYA3493)毒力较参考株SL1344降低了约104倍.免疫保护试验显示,1日龄雏鸡免疫SL1344△cya△asd(pYA3493)后第17天,利用鼠伤寒沙门菌参考株攻毒,保护率为62.5％.[结论]鼠伤寒沙门菌SL1344株环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统构建成功,且具有较好的免疫保护性,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗奠定基础.