USP22aiRNA通过Mdm2-p53通路抑制膀胱癌耐药细胞株T24/MMC的增殖

摘要

目的 研究沉默泛素特异肽酶22(USP22)基因对膀胱癌T24丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)耐药细胞株(T24/MMC)生长活性的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度的MMC(20、40、80、160、320μg/mL)对T24和T24/MMC细胞生长活性的影响.实时荧光定量PCR和Western blot法检测人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1细胞株、T24和T24/MMC细胞中USP22 mRNA和蛋白的表达水平.采用非对称性小RNA(aiRNA)干扰技术沉默USP22,MTT法和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双重染色法分别检测沉默USP22后MMC对T24细胞、T24/MMC细胞生长活性和凋亡的影响.实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测p53和Mdm2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 采用不同浓度的MMC(20、40、80、160、320 μg/mL)处理细胞24 h后,T24细胞的生长活性分别为82.4％、68.7％、44.2％、25.4％和4.7％,与未经MMC处理组比较差异均具有统计学意义(均P＜0.05).然而,0～160μg/mL的MMC对T24/MMC细胞的生长活性无明显影响.与SV-HUC-1细胞比较,USP22在T24及T24/MMC细胞中高表达,且T24/MMC细胞中USP22表达显著高于T24细胞,差异具有统计学意义(P＜0.05).沉默USP22后,MMC对T24细胞的生长活性抑制作用更显著.且当MMC浓度在20～160 μg/mL时,沉默USP22后T24/MMC细胞的生长活性也明显受到抑制,其生长活性分别为85.1％、70.3％、63.2％和47.8％.同时,AO/EB实验结果显示,沉默USP22后给予80 μg/mL的MMC处理24 h,可诱导T24及T24/MMC细胞凋亡.实时荧光定量PCR和Western blot结果进一步显示,转染USP22 aiRNA 24 h后,T24/MMC细胞中p53基因的mRNA和蛋白表达水平上调,Mdm2表达水平下调.结论 USP22 aiRNA通过调控Mdm2-p53通路增强MMC抑制T24细胞增殖的敏感性,同时也能够逆转T24/MMC对MMC的耐药.