敲低LRP1基因对TNF-α诱导的大鼠软骨细胞损伤的影响

摘要

目的 探讨大鼠软骨细胞膜蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)对炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的大鼠软骨细胞损伤的影响.方法 将慢病毒包装的LRP1-shRNA转染原代培养的软骨细胞.转染3d后使用ERK磷酸化抑制剂PD098059(10μmol/L)和P38磷酸化抑制剂SB203580(10μmol/L)分别预处理对照组和shLRP1组软骨细胞30 min,再以TNF-α(30 ng/mL)作用软骨细胞30 min,收集总蛋白行Western blot检测软骨细胞MAPKs通路蛋白和凋亡蛋白表达.收集经TNF-α(30 ng/mL)作用12h的软骨细胞培养液,采用ELISA法检测MMP-13表达水平.结果 经TNF-α作用后,shLRP1组软骨细胞MAPKs通路蛋白ERK、P38活性、MMP-13表达均较对照组明显提高,且可以被PD098059和SB203580所拮抗(均P＜0.05);凋亡蛋白Caspase-3和Bax表达较对照组有明显提高,抑凋亡蛋白p-Akt和Bcl-2表达较对照组明显降低(均P＜0.05).结论 在TNF-α诱导的大鼠软骨细胞损伤中,敲低LRP1表达可激活MAPK通路,上调MMP-13表达和促进细胞凋亡,LRP1有望成为骨关节炎治疗的靶点.