UV照射和MMS诱导下PCNA表达的变化及相关研究

摘要

目的:建立DNA损伤的模型,在蛋白水平和mRNA水平研究PCNA的表达变化情况.方法:UV照射和MMS处理细胞后利用Western blot和实时荧光定量PCR检测PCNA蛋白表达水平和mRNA水平的变化,以及利用倒置荧光显微镜观察细胞的形态变化.运用ShRNA干扰技术降低泛素E3连接酶RAD18和CUL4A的表达,检测内源PCNA蛋白表达水平的变化.结果与结论:UV照射和MMS处理细胞后,细胞形态发生变化,随着时间的延长,大部分细胞趋于死亡.实时荧光定量PCR的结果发现PCNA的mRNA水平下降,但是PCNA蛋白水平的表达无明显变化,说明DNA损伤时PCNA蛋白的稳定性增加,暗示细胞中存在着一定的机制,维持PC-NA蛋白表达量的稳定.干扰E3连接酶CUL4A和RAD18的表达时,PCNA蛋白水平有所升高,提示二者参与了PCNA的降解过程.