四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白转基因斑马鱼模型建立

摘要

目的 探索tet-on四环素诱导表达系统在斑马鱼体内应用策略与技术路线,构建四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼,为条件型功能基因研究及组织特异转基因斑马鱼疾病模型的建立奠定基础.方法 构建肝脏特异启动子fabp10启动rtTA蛋白表达的重组质粒pfabp10-rtTA,联合pTRE-Tight-BI-AcGFP1质粒转染HeLa细胞后给予doxycycline诱导,Western blot法验证;pfabpl0-rtTA联合pTRE-Tight-BI-AcGFP1质粒注射斑马鱼1-细胞期受精卵后,30 μg/mL doxycycline诱导,荧光筛选稳定整合个体.结果 共转染pfabp10-rtTA与pTRE-Tight-BI-AcGFP1的HeLa细胞经1μg/mL浓度doxycycline诱导培养液诱导,GFP表达量显著高于不加doxy-cycline培养液对照组;筛选获得的稳定整合斑马鱼幼鱼,在浓度为30 μg/mL doxycycline条件下,肝脏明显有绿色荧光表达,对照组幼鱼肝脏位置未有明显绿色荧光.结论 Tet-On四环素诱导表达系统可用于建立四环素调控斑马鱼肝脏特异表达外源基因;利用该技术可建立诱导肝脏表达GFP建立转基因斑马鱼品系,为建立条件型转基因斑马鱼疾病模型、探索肝脏器官发生发育等研究提供良好的模式动物工具.