粘虫谷氨酰胺转胺酶(MsTGase)活力测定条件的正交优化及其在幼虫体内的分布

摘要

[目的]本研究旨在优化Grossowicz氧肟酸比色法测定粘虫Mythimna separata谷氨酰胺转胺酶(MsTGase)活力的组合条件,以MsTGase酶活力为依据分析其在不同龄期幼虫体内的分布规律.[方法]取4龄粘虫幼虫,通过组织匀浆和沉析纯化制备MsTGase,采用Grossowicz比色法测定MsTGase酶活力,并对Grossowicz比色法的多重实验因素进行正交优化,进一步结合差速离心法分析不同龄期幼虫体内和亚细胞组分(细胞核和细胞碎片,线粒体,微粒体以及胞质溶胶)中MsTGase酶活力.[结果]结果表明,酶浓度、底物浓度、反应体系pH值、反应温度及钙离子浓度等实验因素都对MsTGase酶活力测定结果产生显著影响,其影响大小顺序为:酶浓度＞温度＞pH＞底物浓度＞Ca2+浓度.MsTGase酶比活力测定的最优化条件:酶浓度20 mg/mL、底物浓度0.04 mol/L、反应体系pH值6.5、测定温度37℃,不添加钙离子.在1-5龄幼虫中以4龄幼虫的MsTGase酶活力最高,其比活力也显著高于其他龄期的,且在1-5龄幼虫胞质溶胶中MsTGase酶活力分别占各亚细胞组分酶活力总和的39％,25％,48％,60％和61％.[结论]所获得的最优化条件适用于粘虫MsTGase酶活力测定.MsTGase在粘虫体内呈显著的龄期表达特征和亚细胞分布规律.