蟑螂浓核病毒(pfDNV)非结构基因启动子的活性研究

摘要

为了研究蟑螂Periplaneta fuliginosa浓核病毒(pfDNV)非结构基因转录调控的机制,用PCR的方法从蟑螂浓核病毒基因组DNA中扩增了非结构蛋白基因ns3翻译起始密码子上游325 bp的启动子序列;并进一步以其作为模板,利用聚合酶链式反应技术,得到6个不同长度的启动子片段和两个定点突变体片段,构建由其驱动的萤火虫荧光素酶基因报告质粒,在脂质体介导下转染多种昆虫细胞,体外分析了该启动子的活性.结果表明: 该325 bp DNA片段在Sf9,S2,Tn368及Ld652细胞中均具有较高的启动子活性;其转录起始基序CAGT对维持该启动子的基本转录活性而言是必需的,而TATA盒对此则是非必需的,但它的存在可显著提高启动子的转录活性.同时,我们还发现,病毒非结构蛋白NS1对该启动子具有反式激活作用,并且这种激活作用的大小取决于NS1蛋白在细胞中的浓度.