乌桕SsSAD基因的原核表达与纯化研究

摘要

乌桕是一种重要的木本油料树种.SAD(stearoyl-acyl ACP desaturase)是油料植物中将饱和脂肪酸转变成不饱和脂肪酸的一种关键脱氢酶.为了进一步揭示乌桕SsSAD的功能,该研究在大肠杆菌中表达了该蛋白.结果表明:(1)通过RT-PCR的方法从乌桕种子中克隆出了SsSAD基因编码区全长序列,并将其克隆到低温诱导的原核表达载体pCold TF上,构建原核重组表达载体pCold TF/SsSAD,转化大肠杆菌BL 21 star (DE3)并获得原核表达工程菌株.(2)通过IPTG法低温诱导表达融合蛋白.该重组质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,融合蛋白分子质量约为101 kD,且在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化和Western blotting检测证实获得了重组蛋白,上述结果为进一步研究乌桕SsSAD的结构和功能奠定了基础.