棉花磷脂酶C基因的克隆及参与油脂代谢的功能分析

摘要

以陆地棉胚珠和纤维为实验材料,利用RT PCR技术克隆得到磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)基因(GhPLC,GenBank登录号:KR154219),将棉花磷脂酶C基因转化拟南芥,分析其在油脂代谢过程中的重要作用.测序鉴定显示,GhPLC基因的全长开放读码框为1 524 bp,编码包含508个氨基酸的蛋白质,理论分子量约为55 kD.序列比对分析显示,GhPLC属于典型的碱性磷酸酶超家族的磷脂酶.利用pET32a-GhPLC原核表达获得分子量约为55 kD左右的重组蛋白GhPLC;酶活力分析显示,重组GhPLC蛋白具有较高的将卵磷脂(PC)催化为二酰甘油(DAG)的酶活力.半定量RT-PCR结果表明,GhPLC基因参与棉花种子和纤维发育过程.构建植物过量表达载体35S::GhPLC并转化哥伦比亚野生型拟南芥,转基因拟南芥中GhPLC基因的表达和PLC酶活力显著提高,且转基因拟南芥种子的油脂含量提高了5.3％.