线虫烯脂酰CoA水合酶的克隆、表达、纯化及初步晶体学分析

摘要

生物体β-氧化循环是脂肪酸氧化分解的主要途径,许多代谢疾病都与其密切相关.线虫β-氧化循环与人类相似,但与其相关的研究报道却很少.线虫基因C32E8.9编码的蛋白被WormBase命名为烯脂酰CoA水合酶(WormBase ID:CE29693),被推测具有催化β-氧化循环第二步反应的功能.作者将C32E8.9基因克隆到原核表达载体上,在大肠杆菌中获得高效表达,并分别纯化了母体蛋白以及硒代蛋白衍生物.多角度静态光散射实验表明该蛋白的聚合状态为三聚体.该蛋白在沉淀剂2-甲基-2,4-戊二醇的作用下形成可供衍射分析的六棱柱形状晶体,空间群为P21,晶胞参数为a-79.0(A),b=82.4(A),c=79.2(A),α=γ=90.0°,β=120°,数据分析表明该晶体非单晶,是一种罕见的蛋白质"三晶"--包含三套晶格.