青霉素酰化酶活性中心的定点突变

摘要

对E.coli ATCC 11105的青霉素酰化酶(penicillin G acylase, PGA)活性中心的Ser290分别进行了定点突变和化学修饰.将活性中心的Ser290改变成Cys或Secys, PGA水解活力均大为下降, 但仍保留部分活性.其对底物6-硝基(3-苯乙酰氨基)苯甲酸(6-nitro-3-phenylacetamido benzoic acid, NIPAB)的kcat分别从135s-1降低到0.63s-1和0.38s-1, Km变化较小; 对底物青霉素G的kcat分别从34.38s-1下降到0.23s-1和0.06s-1, Km亦基本保持不变; 而PGA突变体的合成活力分别下降至20%和5%左右, 变化幅度远小于水解活力.探讨了PGA的水解活力与自发加工的关系, 对Choi等人的实验结果进行了修正.