青霉素酰化酶

摘要： 水产品腐败菌的群体感应现象是加速水产品腐败的原因之一。近年来,由于化学保鲜剂的使用导致许多腐败菌产生抗性,并且其安全性也令消费者担忧,因此研究安全、高效的生物保鲜剂是水产保鲜中的重要课题。本研究用固定化青霉素酰化酶来抑制水产品优势腐败菌——荧光假单胞菌的群体感应现象。利用CV026验证固定化青霉素酰化酶对荧光假单胞菌AHLs的淬灭作用;利用光学显微镜和扫描电镜研究酶对生物被膜的影响;利用牛奶琼脂平板验证胞外蛋白酶的活性;通过分子对接预测酶与不同AHLs的相互作用。结果表明,固定化青霉素酰化酶能够降低荧光假单胞菌AHLs的含量,从而减少紫色杆菌CV026紫色菌素的生成,减缓荧光假单胞菌生物被膜和胞外聚合物的形成。同时也干预了胞外蛋白酶的产生,当酶质量浓度为15 mg/mL时无法观察到明显的蛋白抑制圈。分子对接结果显示,该酶与短链和长链的信号分子都能成功对接,然而,更偏向于长链AHLs。3D对接结果显示,C14-HSL被活性中心周围的氨基酸残基全部包裹,相互以氢键连接,氢键的数量较多,结合作用更强。由此说明固定化青霉素酰化酶具有良好的群体感应淬灭活性,可作为新型保鲜剂应用于水产品保鲜。

摘要： 采用吸附法将青霉素酰化酶(PGA)固定于AB-8树脂上,通过固相酶催化D-苯甘氨酸甲酯与6-氨基青霉烷酸(6-APA)反应制备氨苄西林,对酰化反应中的最适pH条件、溶剂体系、反应温度、反应时间、底物浓度进行实验研究.以氨苄西林收率和水解比为评价条件,固相酶最适催化pH值为6.5,通过正交实验分析表明,在异丙醇-PBS缓冲体系中,350mg PGA/AB-8(固定化酶活性113U·g-1)催化下,反应温度10°C,底物浓度(D-PGME:6-APA)为3.5:1,反应时间8h,氨苄西林收率达到71.3％.固相PGA酶重复回用6次,氨苄西林收率由71.3％降至63.6％.

摘要： 以UV为检测手段,通过对反应生成的6-氨基青霉烷酸(6-aminopenicillanic acid,6-APA)与对二甲氨基苯甲醛(paradimethylaminobenzaldehyde,PDAB)的显色反应,分别研究了在不同温度和pH值的水溶液中,在醇与NaH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液配制成的混合液中固定化青霉素酰化酶(IPA)催化青霉素G(penicillin G,PG)酶活保留率随时间的变化.结果表明:在25～55°C,温度越高,青霉素催化能力越强;温度越低,酶活性保持率越高;在弱碱性条件下青霉素酰化酶催化能力强,在偏酸性或接近中性的条件下酶的保存稳定性较强;对多元醇,随着醇中羟基质量分数的减小,IPA的酶活保留率依次减小;对于一元醇,溶剂的极性与IPA活性呈反相关关系,即溶剂极性越强,IPA活性越低.

摘要： 目的 建立一种HPLC法测定固定化青霉素酰化酶合成头孢羟氨苄活力的方法.方法 酶与其底物7-ADCA及D-对羟基苯甘氨酸甲酯,在20°C的溶液中,搅拌转速为250r/min条件下反应10min,通过测定反应液中头孢羟氨苄的含量,从而换算出合成酶活力的数值.采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:0.02moFL磷酸二氢钾溶液(用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.0)-甲醇(98∶2);流速:1.0mL/min;柱温:25°C;检测波长:230nm.结果 头孢羟氨苄在0.24～0.39mg/mL范围内线性关系良好(r=1.0000),回收率均在99％～101％范围内,RSD为0.40％.结论 该测定方法专属性强、准确可靠、重现性好,适用于青霉素酰化酶合成酶活力的检测.

摘要： 头孢菌素抗生素是一种抗菌活性强、疗效高的抗生素.生产过程中常用化学法和酶法来制取,但是化学法对环境污染严重,对反应条件比较苛刻,因此,酶法成为生产的必然趋势.酶法合成比化学法合成显示出更先进的科学技术与广泛应用,因此人类社会越来越看重用酶法去制造头孢菌素类抗生素.酶法合成的基本研究方法为平衡与动力学两个方面的操控,依靠新科技和与之相关的多种方法完备生产过程的基本条件,提高酶的动态活力,使生产过程更加完整连贯,趋于现代化和一体化,不断去革新进步,应用科学技术对抗生素进行生产制造.本文从不同的定义和视角去探讨酶法合成头孢菌素类抗生素的生产过程.

摘要： 头孢菌素抗生素是一种抗菌活性强、疗效高的抗生素。生产过程中常用化学法和酶法来制取,但是化学法对环境污染严重,对反应条件比较苛刻,因此,酶法成为生产的必然趋势。酶法合成比化学法合成显示出更先进的科学技术与广泛应用,因此人类社会越来越看重用酶法去制造头孢菌素类抗生素。酶法合成的基本研究方法为平衡与动力学两个方面的操控,依靠新科技和与之相关的多种方法完备生产过程的基本条件,提高酶的动态活力,使生产过程更加完整连贯,趋于现代化和一体化,不断去革新进步,应用科学技术对抗生素进行生产制造。本文从不同的定义和视角去探讨酶法合成头孢菌素类抗生素的生产过程。

摘要： 目的:探讨酶法合成头孢氨苄工艺优化,并对母液中的母核进行回收利用.方法:通过对酶催化法的合理利用,在选定母核和酰基供体的基础上,在水相中以固定化青霉素酰化酶催化合成头孢氨苄.在这一条件下,对反应温度、反应时间以及投酶量等条件进行优化处理,进一步考察头孢氨苄摩尔收率以及产品质量.结果:在标准工艺优化后,头孢氨苄摩尔收率在85%以上,而套用母液中回收的的7-ADCA后头孢氨苄摩尔收率在91%以上,明显高于当前化学法的收率,可知产品质量合格.结论:酶法合成头孢氨苄工艺具有良好的应用价值,其反应条件温和,且收率较高,与当前可持续发展理念保持高度一致,属于绿色合成工艺.

摘要： 青霉素酰化酶是一种重要的工业用酶.它应用广泛,能催化合成β-内酰胺抗生素及其中间体、多肽、氨基酸等多种手性化学品.本文分为6-APA和7-ADCA的制备、β-内酰胺抗生素的合成、手性化合物的拆分、前手性化合物的不对称水解和多肽合成等5个方面进行阐述.

摘要： The level of activity of immobilized penicillin acylase is the important factor which affects the speed of enzymatic synthesis of amoxicillin, thus it plays signiifcant role how to determine synthetic activity of immobilized penicillin acylase. Currently, the determination of activity of penicillin acylase is focus on hydrolytic activity of penicillin acylase. But there is lack of the reports on determination in activity of synthesis of amoxicillin, which leads to the fact that fast determination of the synthesis speed from penicillin acylase to amoxicillin may be impossible and the production cannot be guided from theory. In this article, the activity of amoxicillin synthesized from penicillin acylase was deifned and the method for measuring the activity was studied. It was shown that this method is easy to operate and the result is accurate and reliable. Moreover, by using this method the activities of penicillin acylases produced from different factories are easy to be compared so that the comparing results can be used as guidance for production.%固定化青霉素酰化酶的活性高低是影响酶催化合成阿莫西林速度的决定性因素，如何测定固定化青霉素酰化酶的合成活性起着至关重要的作用。目前，对青霉素酰化酶活性的测定主要集中在青霉素酰化酶的水解活性，而对其合成阿莫西林活性的研究较少，这导致不能快速的鉴别青霉素酰化酶合成阿莫西林的快慢，不能有效的指导生产。文章对固定化青霉素酰化酶合成阿莫西林的活性进行了定义，并研究了合成活性的测定方法，该测定方法准确可靠，操作简捷，便于比较不同厂家生产的青霉素酰化酶活性的高低，对工业生产起指导作用。

摘要： 固定化青霉素酰化酶的活性高低是影响酶催化合成阿莫西林速度的决定性因素，如何测定固定化青霉素酰化酶的合成活性起着至关重要的作用。目前，对青霉素酰化酶活性的测定主要集中在青霉素酰化酶的水解活性，而对其合成阿莫西林活性的研究较少，这导致不能快速的鉴别青霉素酰化酶合成阿莫西林的快慢，不能有效的指导生产。文章对固定化青霉素酰化酶合成阿莫西林的活性进行了定义，并研究了合成活性的测定方法，该测定方法准确可靠，操作简捷，便于比较不同厂家生产的青霉素酰化酶活性的高低，对工业生产起指导作用。

摘要： 本文通过醛丙基三甲氧基硅烷对MCFs介孔分子筛表面进行功能化，在介孔分子筛表面引入链长较短的有机醛基官能团，然后用共价结合方法实现青霉素酰化酶在醛基功能化的介孔分子筛表面的固定化，提高固定化酶的表观活性和操作稳定性。

摘要： 青霉素酰化酶是半合成β-内酰胺类抗生素生产中最关键的酶，而新型介孔分子筛(如SBA-15和KIT-6等)具有较大、连续可调的孔径、高的比表面积、较大的吸附容量和孔道内富含弱酸性羟基，可以使体积较大的酶分子固定于分子筛介孔中和反应产物及时扩散出孔道，保持固定化酶适宜的微环境，因而制得的固定化酶具有较高的催化活性，同时固定化酶的使用温度接近室温，可以避免介孔分子筛普遍存在的水热稳定性差的问题，因此，介孔分子筛是一类很有发展前途的酶固定化新型无机载体。本文将青霉素酰化酶固定到KIT-6和SBA-15介孔分子筛的表面，研究介孔分子筛的结构、孔径、比表面积和表面性质对固定化酶的表观活性和操作稳定性的影响。

摘要： 目前,因为固定化酶的性质比可溶性酶及其相关技术优越,工业上对固定化酶的利用也与日俱增,人们对固定化酶的研究极感兴趣[1].酶固定化载体可分为两类:无机载体和有机载体.与广泛使用的有机载体相比较,无机载体具有更高的机械强度和化学稳定性,结构和表面性质容易控制,其突出优势是载体可以重复使用,这就大大降低了固定化酶的成本,也避免了已失活的固定化酶的闲置问题.目前,生物酶在无机载体上的固定化逐渐引起研究者的兴趣,研究较多的就是无机多孔材料,如多孔玻璃、陶瓷、硅藻土等.介孔分子筛具有较大、连续可调的孔径、高的比表面积、较大的吸附容量和孔道内富含弱酸性羟基,可以使体积较大的酶分子固定于分子筛介孔中和反应产物及时扩散出孔道,保持固定化酶适宜的微环境,因而制得的固定化酶具有较高的催化活性,是一类很有发展前途的新型固定化无机载体[2].本文合成了一种新型的Ia3d介孔分子筛,并对其进行表面修饰后固定化青霉素酰化酶.

摘要： 本工作采用反相悬浮聚合技术成功地合成了甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)-丙烯酰胺(AM)-N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(MBAA)珠状交联聚合物,研究了含环氧基载体对青霉素酰化酶的固定化作用及固定化酶水解青霉素G制备6-氨基青霉烷酸的催化性能.

摘要： 本文以液体石蜡为主悬浮剂,甲醇水溶液作致孔剂,采用反相悬浮聚合技术,合成了大孔甲基丙烯酸缩水甘油脂与N,N′-亚甲基双丙烯酰胺交联聚合物GM,并对其表面结构及固定化青霉素酰化酶性能进行了研究.

摘要： 氨苄西林是临床广泛使用的β-内酰胺类广谱抗生素，其制备方法有化学合成和酶法合成。与传统化学合成法相比，酶法合成工艺条件温和，产品质量高，且反应过程中省去了化学合成工艺中毒性物质的使用。青霉素酰化酶(PGA,EC3.5.1.11)对氨苄两林的合成具有很好的催化活性，目前，对于介孔分子筛固定化青霉素酰化酶的应用主要集中于水解青霉素G制备中间体6-APA，用于6-APA酰化合成氨苄两林的研究仍缺乏报道。研究表明，SBA-15介孔分子筛表面嫁接环氧基后制备的固定化青霉素酰化酶PGA/G-SBA-15，对青霉素G水解反应具有很好的催化性能。本文研究了固定化酶PGA/G-SBA-15对合成氨苄西林的催化性能和反应规律。

摘要： 制备了具有长程有序结构、孔径分布单一和高比表面积的立方MCM-48介孔分子筛,用作青霉素酰化酶(PGA)固定化载体,获得37°C下水解青霉素G钾盐制备6-氨基青霉烷酸(6-APA)的表观活性达1509IU/g的PGA/MCM-48固定化酶.固定化酶在pH4.5～9.0、温度低于40°C时催化活性稳定,其催化水解青霉素G的最适反应温度和最适pH值分别为50°C和8.0.固定化酶经6次连续间歇操作使用,水解活性保持初始活性的83﹪.

摘要： 本工作选择不同的致孔剂,以水溶性N,N′-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,共聚甲基丙烯酸缩水甘油酯与甲基丙烯酰胺,通过反相悬浮聚合技术合成了珠状亲水性甲基丙烯酸缩水甘油酯交联共聚物.通过测定其比表面积、孔径分布和固定化青霉素酰化酶的表观活性,探讨了致孔剂对共聚物的物理结构和固定化青霉素酰化酶性能的影响.

摘要： 利用反相悬浮聚合技术制备了亲水性环氧基聚合物磁性微球，微球表面存在着大量的活性环氧基团，能够与青震素酰化酶(PGA)的氨基产生化学作用，形成了超顺磁性固定化酶微球.制备的磁性微球具有大孔结构和较高的比表面积，固定化酶的载酶量高，固定化酶在37°C下水解青震素G钾合成6-氨基青霉烷酸(6-APA)的表观活性达748IU/g.磁性固定化PGA在磁场的作用下能快速沉降并与产物分离，防止了固定化酶在使用中的流失，因而具有良好的工业应用前景.

摘要： 利用反相悬浮聚合技术制备了亲水性环氧基聚合物磁性微球，微球表面存在着大量的活性环氧基团，能够与青震素酰化酶(PGA)的氨基产生化学作用，形成了超顺磁性固定化酶微球.制备的磁性微球具有大孔结构和较高的比表面积，固定化酶的载酶量高，固定化酶在37°C下水解青震素G钾合成6-氨基青霉烷酸(6-APA)的表观活性达748IU/g.磁性固定化PGA在磁场的作用下能快速沉降并与产物分离，防止了固定化酶在使用中的流失，因而具有良好的工业应用前景.

摘要： 本发明涉及青霉素G酰化酶突变体及其在酶法合成头孢孟多中的应用。通过半理性设计的酶工程改造技术对木糖氧化无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans)PX02来源的青霉素G酰化酶进行突变，获得了一种反应活性更高，反应速率更快，转化率更好的PGA突变体。该PGA突变体对产物的水解活性大大降低，在产率达到最大值后，几乎不水解产物，具有广阔的工业应用前景。

摘要： 本发明涉及青霉素G酰化酶突变体及其在酶法合成头孢孟多中的应用。通过半理性设计的酶工程改造技术对木糖氧化无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans)PX02来源的青霉素G酰化酶进行突变，获得了一种反应活性更高，反应速率更快，转化率更好的PGA突变体。该PGA突变体对产物的水解活性大大降低，在产率达到最大值后，几乎不水解产物，具有广阔的工业应用前景。

摘要： 本发明公开了一种青霉素酰化酶晶体和固定化青霉素酰化酶，它们可分别由下列方法制备得到：将蛋白质浓度为8～12mg/ml、纯度在25u/mg蛋白以上的青霉素酰化酶纯化溶液，加入含有沉淀剂聚乙二醇、pH为6.0～7.0的缓冲溶液中进行结晶，其中聚乙二醇的重量占缓冲溶液体积的9～13%；将所述的青霉素酰化酶晶体加入含有双功能交联剂的缓冲系统中进行交联反应制得固定化青霉素酰化酶。该固定化青霉素酰化酶具有对温度、酸碱、有机溶剂、蛋白酶不敏感，机械强度高，酶的含量及纯度高，使用方便，颗粒形状规则等特点。

摘要： 涉及青霉素酰化酶与含青霉素酰化酶细胞的固定化技术，将四甲(乙)氧基硅烷和其衍生物在水和催化剂存在下进行水解和缩聚反应，形成溶胶，将青霉素酰化酶(细胞)配于水或pH为3～11的缓冲液中后加入溶胶，反应后得凝胶，或将青霉素酰化酶(细胞)配于水或缓冲液中，并加入有机溶剂及表面活性剂或悬浮剂，形成反相胶束或悬浮体系，在体系中加入溶胶，反应后得凝胶颗粒，保持青霉素酰化酶(细胞)的高活性，化学稳定性好，具有极高的抗变性能力，可长期保存。

摘要： 本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种用于制备6‑氨基青霉烷酸的青霉素酰化酶的分离纯化与固定化耦合方法。该方法包括以下步骤：(1)制备含有青霉素酰化酶粗酶液和无机盐的无机盐混合溶液，该含盐混合溶液中所述无机盐的浓度为0.05‑0.35g/mL；(2)将步骤(1)所得无机盐混合溶液与叔丁醇混合，然后进行分相，得到富含叔丁醇的上相溶液、中相固体以及富含盐和青霉素酰化酶的下相溶液组成的三相分配体系；(3)向步骤(2)所得下相溶液中加入载体进行青霉素酰化酶的固定化。本发明的方法操作简便、所得青霉素酰化酶的活性和收率较高。

摘要： 本发明提供了一种青霉素酰化酶的固定化方法，属于酶的固定化技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将桥接体溶液滴加到载体溶液中，进行第一缩合反应2～5h后，进行第一固液分离，收集固相组分，获得带桥接体的载体；2)将步骤1)获得的带桥接体的载体与青霉素酰化酶水溶液混合搅拌得到混合料液，向所述混合料液中滴加三乙氨进行第二缩合反应20～40h后，进行第二固液分离，收集固相组分为固定化的青霉素酰化酶；所述桥接体为主链包含2～8个碳原子的卤酰卤；所述载体为氨基树脂。本发明所述方法制备获得的青霉素酰化酶酶活性高，稳定性好。

摘要： 本发明公开了一种青霉素酰化酶晶体和固定化青霉素酰化酶，它们可分别由下列方法制备得到：将蛋白质浓度为8～12mg/ml、纯度在25u/mg蛋白以上的青霉素酰化酶纯化溶液，加入含有沉淀剂聚乙二醇、pH为6.0～7.0的缓冲溶液中进行结晶，其中聚乙二醇的重量占缓冲溶液体积的9～13％；将所述的青霉素酰化酶晶体加入含有双功能交联剂的缓冲系统中进行交联反应制得固定化青霉素酰化酶。该固定化青霉素酰化酶具有对温度、酸碱、有机溶剂、蛋白酶不敏感，机械强度高，酶的含量及纯度高，使用方便，颗粒形状规则等特点。

摘要： 涉及青霉素酰化酶与含青霉素酰化酶细胞的固定化技术,将四甲(乙)氧基硅烷和其衍生物在水和催化剂存在下进行水解和缩聚反应,形成溶胶,将青霉素酰化酶(细胞)配于水或pH为3～11的缓冲液中后加入溶胶,反应后得凝胶,或将青霉素酰化酶(细胞)配于水或缓冲液中,并加入有机溶剂及表面活性剂或悬浮剂,形成反相胶束或悬浮体系,在体系中加入溶胶,反应后得凝胶颗粒,保持青霉素酰化酶(细胞)的高活性,化学稳定性好,具有极高的抗变性能力,可长期保存。

摘要： 本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种用于制备6‑氨基青霉烷酸的青霉素酰化酶的分离纯化与固定化耦合方法。该方法包括以下步骤：(1)制备含有青霉素酰化酶粗酶液和无机盐的无机盐混合溶液，该含盐混合溶液中所述无机盐的浓度为0.05‑0.35g/mL；(2)将步骤(1)所得无机盐混合溶液与叔丁醇混合，然后进行分相，得到富含叔丁醇的上相溶液、中相固体以及富含盐和青霉素酰化酶的下相溶液组成的三相分配体系；(3)向步骤(2)所得下相溶液中加入载体进行青霉素酰化酶的固定化。本发明的方法操作简便、所得青霉素酰化酶的活性和收率较高。

摘要： 本发明提供了一种青霉素酰化酶的固定化方法，属于酶的固定化技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将桥接体溶液滴加到载体溶液中，进行第一缩合反应2～5h后，进行第一固液分离，收集固相组分，获得带桥接体的载体；2)将步骤1)获得的带桥接体的载体与青霉素酰化酶水溶液混合搅拌得到混合料液，向所述混合料液中滴加三乙氨进行第二缩合反应20～40h后，进行第二固液分离，收集固相组分为固定化的青霉素酰化酶；所述桥接体为主链包含2～8个碳原子的卤酰卤；所述载体为氨基树脂。本发明所述方法制备获得的青霉素酰化酶酶活性高，稳定性好。