反转录病毒载体介导的人β-珠蛋白基因低水平表达的机制初探

摘要

以人β-珠蛋白基因簇基因座控制区DNaseI高敏位点2和高敏位点3组合的微小基因座控制区作为调控元件, 以374 bp第二内含子部分缺失的2.0 kb β-珠蛋白基因作为结构基因的反转录病毒重组体, 通过建立ψ-2产病毒细胞系和瞬时转染双向性包装细胞系ψ-A两种方法获得重组病毒. 感染鼠红白血病细胞后, Southern杂交鉴定前病毒整合完整性, 用RNase保护实验检测人β-珠蛋白基因的表达, 通过PCR产物测序确定前病毒结构. 结果表明, 在瞬时转染ψ-A来源的重组病毒转导和质粒转染的鼠红白血病细胞中, 人β-珠蛋白基因的表达水平分别达到内源性鼠α-基因表达的(52.4±11.2)% (n=12)和 (73.8±14.3)% (n=12, 未确定整合拷贝数); 而在ψ-2产病毒细胞系来源的病毒转导的细胞中, 表达水平低于3%, 前病毒序列分析发现其高敏位点2中出现一个点突变, 这可能是人β-珠蛋白基因呈低水平表达的一个原因.