橄榄绿链霉菌细胞膜中几丁单、寡糖结合蛋白质的分离、纯化和结合动力学

摘要

橄榄绿链霉菌细胞膜中存在能与N-乙酰葡糖胺特异性结合的蛋白质. 采用超声波破碎、超速离心等方法, 分离得到细胞膜后用Triton X-100抽提, 经连续的阴离子层析后, 可分别得到能与N-乙酰葡糖胺特异性结合的46.0 kD和47.5 kD蛋白质. 底物竞争结合实验证实, 这两种蛋白质还能与其他几丁质降解产物(几丁二糖至几丁六糖)特异性结合而不与葡萄糖、纤维二糖等结合. 采用介质表面感应技术(surface plasmon resonance)检测出46 kD蛋白质与几丁单糖至几丁六糖的解离常数(Kd)在8.29×10-9～1.95×10-5 mol/L之间, 单糖最高而三糖最低. 决定其差异的主要因子是底物结合速率(Kon)而非解离速率(Koff). N末端氨基酸序列分析结果推测, 该蛋白质属于一个潜在的ATP结合转运系统.