血管内皮细胞生长抑制因子N端部分缺失对生物活性的影响

摘要

血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelial cell growth inhibitor, VEGI)是近年来发现的一类TNF家族新成员, 具有抑制内皮细胞增殖与新血管生成的作用. 为了探讨VEGI蛋白N端对其活性的影响, 进行了VEGI与TNF家族成员基于结构知识的一级结构序列联配, 在此基础上构建、表达了N端缺失43与51个氨基酸的VEGI突变体. N端缺失43个氨基酸的VEGI(VEGI131)表达量占总菌体蛋白质的25.2%, N端缺失51个氨基酸的VEGI(VEGI123)表达量为27.8%, 纯化后纯度分别为92.5%(VEGI131)和 91.6%(VEGI123). VEGI131可明显抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖, IC50约为35 mg/L, 而VEGI123在同样条件下几乎无抑制作用, 野生型VEGI 即N端缺失23个氨基酸的VEGI(VEGI151, 由作者实验室制备)IC50约为27 mg/L. 鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验证明, VEGI151可使主血管数显著减少, VEGI131可使主血管变细, 毛细血管数减少, 而VEGI123与对照组相比无明显变化. 体内外研究显示VEGI活性从高到低依次为: VEGI151> VEGI131> VEGI123. 结果提示: VEGI的N端前43个氨基酸对活性无明显影响, 而第44～51位氨基酸对其生物活性的发挥具有重要作用.