甘蓝自交不亲和信号传导中THL1和SRK相互作用的体外检测

摘要

在甘蓝自交不亲和信号传导中SRK和THL1之间可能存在相互作用.为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增了THL1和SRK激酶结构域(记为 SRKEl)编码序列,构建了THL1原核表达质粒pET43.1-THL1,SRKEl原核表达质粒pET431-SRKEl和真核表达质粒pPIC9K-SRKEl,分别在宿主菌大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115中进行表达.THL1融合蛋白经胰岛素检测,表明表达的THL1有氧化还原活性.建立了体外检测蛋白质相互作用的新方法,并用该方法对THL1与SRKEl的相互作用进行了检测,结果表明THL1可与SRKEl相互作用并形成稳定的复合体,这为深入分析THL1与SRK相互作用机理提供了理论和技术基础.