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第一章文献综述
1.1植物自交不亲和性的简介
1.1.1自交不亲和性植物的表现方式
1.1.2自交不亲和性植物的分类
1.2配子体自交不亲和信号传导分子机制的研究进展
1.2.1以S-RNase为基础的自交不亲和信号传导
1.2.2以胞质自由钙离子为第二信使的自交不亲和信号传导
1.2.3配子体自交不亲和植物不亲和机理
1.3孢子体自交不亲和信号传导分子机制研究进展
1.3.1柱头中特异表达的功能基因
1.3.2花粉中特异表达的功能基因
1.3.3 S位点复等位基因间的物理距离及其显隐性关系
1.3.4参与自交不亲和细胞识别与信号传导反应的其他功能基因
1.4.自交不亲和性研究展望
1.5蛋白质-蛋白质相互作用的研究策略
1.5.1介导蛋白质-蛋白质间相互作用的几种结构域
1.5.2蛋白相互作用的研究技术
1.5.3蛋白质相互作用研究技术展望
第二章 引 言
第三章甘蓝ARC1臂重复蛋白编码基因的克隆与表达
3.1材料
3.1.1植物材料
3.1.2质粒与菌株
3.1.3主要仪器设备
3.1.4工具酶和主要分子生物学试剂盒
3.1.5培养基和其他试剂
3.2方法
3.2.1甘蓝基因组DNA提取
3.2.2甘蓝柱头总RNA提取
3.2.3 cDNA第一链合成
3.2.4引物设计
3.2.5ARC1基因PCR扩增
3.2.6目的片段克隆
3.2.7测序与序列分析
3.2.8 ARC1在大肠杆菌BL21中表达
3.2.9表达产物纯化
3.3结果与分析
3.3.1甘蓝基因组DNA和柱头总RNA的提取
3.3.2 ARC1基因克隆与序列分析
3.3.3 ARC1表达质粒构建与鉴定
3.3.4 ARC1在大肠杆菌BL21中诱导表达
3.3.5 ARC1蛋白的纯化
3.4小结
第四章甘蓝SRK激酶结构域编码基因的克隆与表达
4.1材料
4.1.1植物材料
4.1.2质粒与菌株
4.1.3主要仪器设备
4.1.4工具酶及主要的分子生物学试剂盒
4.1.5培养基及其他试剂
4.2方法
4.2.1甘蓝基因组DNA提取
4.2.2甘蓝柱头总RNA提取
4.2.3 cDNA第一链合成
4.2.4引物设计
4.2.5 SRKE1基因PCR扩增
4.2.6目的片段克隆
4.2.7测序与序列分析
4.2.8 SRKE1在大肠杆菌BL21中表达
4.3结果与分析
4.3.1 SRKE1基因克隆与序列分析
4.3.2表达质粒pET43.1-SRKE1构建与鉴定
4.3.3 SRKE1在大肠杆菌BL21中的诱导表达
4.3.4 SRKE1蛋白的纯化
4.4小结
第五章甘蓝自交不亲和信号传导元件ARC1与SRK相互作用的体外检测
5.1材料
5.2方法
5.2.1诱饵蛋白制备
5.2.2靶蛋白溶液制备
5.2.3 ARC1与SRKE1相互作用检测
5.3结果与分析
5.3.1 Ni+剩余检测
5.3.2 ARC1与SRKE1相互作用电泳检测
5.4小结
第六章讨论
6.1 ARC1蛋白的结构与功能分析
6.2 SRKE1蛋白的结构与功能分析
6.3外源基因的体外表达
6.4 ARC1与SRK相互作用分析及其构建平台应用
6.5蛋白质相互作用的研究策略探讨
第七章结论与创新点
7.1结论
7.2创新点
7.3展望
参考文献
附录
学习期间发表的论文和参加的科研项目
致谢