羽衣甘蓝SRK13-b的克隆及激酶结构域的原核表达

摘要

提取羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA，利用RT-PCR的方法分离S13-b位点受体激酶基因(SRK16-b)。获得的羽衣甘蓝SRK13-B基因的长度为2571 bp，编码856个氨基酸，GeneBank收录号为Eu180597。将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入到大肠杆菌表达载体pET14b中，构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT，然后转化BL21(DE3)pLysS菌株中，经过0.1 mM IPTG诱导后，SDS-PAGE显示出约43 kDa蛋白质特异诱导表达，最后通过镍离子金属整合亲和层析的方法成功地将SRK13-b激酶结构域的融合蛋白纯化出来。