过氧化氢诱导人巨核细胞系Dami氧化应激模型的建立及评价

摘要

目的 探讨过氧化氢(H2O2)诱导Dami细胞氧化应激模型的条件,建立并评价模型.方法 不同浓度过氧化氢处理Dami细胞后,Giemsa染色,显微镜观察细胞形态学的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,绘制生长曲线,计算半数抑制浓度(IC50);加载DCFH-DA探针后流式细胞仪检测细胞内活性氧自由基水平;Western blot检测核因子NF-E2相关因子(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)表达量.结果 随着H2O2浓度升高,Dami细胞核皱缩趋于明显,存活率下降,IC50为(0.9132±0.144) mmol/L;0.1 mmol/L、1 mmol/L、10 mol/LH2O2处理Dami细胞2h,细胞氧化应激阳性率分别为12.11％、20.91％、52.53％;H2O2处理Dami细胞24h后,抗氧化蛋白Nrf2、GCLC水平升高,未检测到HO-1和NQO1的表达.结论 1 mmol/L H2O2是建立Dami细胞氧化应激模型的合适浓度.Dami细胞抗氧化应激反应与Nrf2/ARE通路有关.