过氧化氢诱导人巨核细胞系Dami氧化应激模型的建立及评价

摘要

目的探讨过氧化氢（H202）诱导Dami细胞氧化应激模型的条件，建立并评价模型。方法不同浓度过氧化氢处理Dami细胞后，Giemsa染色，显微镜观察细胞形态学的变化；CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性，绘制生长曲线，计算半数抑制浓度（IC50）；加载DCFH—DA探针后流式细胞仪检测细胞内活性氧自由基水平；Westernblot检测核因子NF—E2相关因子（N㈣、醌氧化还原酶（NQ01）、血红素加氧酶（HO-1）、1-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位（GCLC）表达量。结果随着H202浓度升高，Dami细胞核皱缩趋于明显，存活率下降，Ic50为（0．9132±0．144）mmol／L；0．1mmol／L、1mmol／L、10mmol／LH2O2处理Dami细胞2h，细胞氧化应激阳性率分别为12．11％、20．91％、52．53％；H2O2处理Dami细胞24h后，抗氧化蛋白Nrf2、GCLC水平升高，未检测到HO-1和NQ01的表达。结论1mmol／LH2O2是建立Dami细胞氧化应激模型的合适浓度。Dami细胞抗氧化应激反应与Nrf2／ARE通路有关。