盐酸戊乙奎醚预先给药对大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤的影响及其相关机制的研究

摘要

高强度军事训练、战创伤等可导致横纹肌溶解症，进而导致急性肾损伤，病死率较高。因此，探讨横纹肌溶解致急性肾损伤的致病机制及其防治措施，具有重大的军事价值和临床意义。本课题组以往研究表明，抗胆碱药山莨菪碱可通过改善微循环、减轻组织氧化应激反应、抗肾细胞凋亡等途径，减轻横纹肌溶解导致的大鼠急性肾损伤。盐酸戊乙奎醚(PHC)是一种新型莨菪类选择性抗胆碱药，同时具有抗毒蕈碱和抗烟碱作用，目前在国内已广泛应用于麻醉术前用药。研究表明，PHC具有减轻组织氧化应激、抗细胞凋亡等作用，其还可改善大鼠肾缺血-再灌注损伤。而PHC是否可减轻横纹肌溶解导致的急性肾损伤，及其分子作用机制如何，尚不明确，有待进一步研究。
　　目的：本研究拟通过建立大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤模型，采用PHC预先给药的干预方法，评价PHC对大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤的影响及其相关机制。
　　方法：雄性清洁级SD大鼠90只，体重200～220 g，采用随机数字表法分为5组（n=18）:对照组（C组），双侧后肢肌肉注射生理盐水10 ml/kg;模型组(AKI组)，双侧后肢肌肉注射50％甘油生理盐水溶液10 ml/kg;戊乙奎醚预处理组(PHC组)，甘油肌注30 min前给予腹腔注射盐酸戊乙奎醚0.2 mg/kg; HO-1抑制剂组(ZnPP组)，甘油肌注24 h前给予腹腔注射ZnPP10 mg/kg;戊乙奎醚预处理+HO-1抑制剂组(PHC+ZnPP组)，按PHC组和ZnPP组的处理方法分别给予腹腔注射ZnPP和PHC。各组于甘油肌注后1h、6h和24 h时分别随机选取6只大鼠，采集静脉血样测定血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、肌酸激酶(CK)和肌红蛋白浓度;采集肾组织标本，分别行肾组织病理检查、血红素加氧酶1(HO-1)活性测定、免疫组织化学检查、原位TUNEL法细胞凋亡率测定、RT-qPCR检测和Western blotting检测。
　　结果：(1)与C组比较，AKI组各时点血清BUN、Cr和CK浓度、肾小管损伤评分升高(P＜0.01);与AKI组比较，PHC组各时点血清BUN和Cr浓度、肾小管损伤评分降低(P＜0.01或0.05);与PHC组比较，ZnPP组和PHC+ZnPP组各时点上述指标升高(P＜0.01或0.05);(2)与C组比较，AKI组血清和肾组织肌红蛋白水平升高，肾组织HO-1活性增强，肾组织核蛋白Nrf2表达上调，肾组织HO-1在基因和蛋白质水平上表达上调;与AKI组比较，PHC组血清和肾组织肌红蛋白水平降低，肾组织HO-1活性增强，肾组织Nrf2和HO-1在基因和蛋白质水平上表达上调;与PHC组比较，ZnPP组和PHC+ZnPP组血清和肾组织肌红蛋白水平升高，肾组织HO-1活性减低，部分时点肾组织Nrf2和HO-1在基因和蛋白质水平上表达下调;(3)与C组比较，AKI组各时点肾细胞凋亡率升高(P＜0.01），肾组织GRP78和caspase-12在基因和蛋白质水平上表达上调(P＜0.01);与AKI组比较，PHC组各时点肾细胞凋亡率降低(P＜0.01或0.05)，部分时点肾组织GRP78和caspase-12在基因和蛋白质水平上表达下调(P＜0.01）。
　　结论：(1)横纹肌溶解可导致大鼠急性肾损伤，PHC预先给药可减轻大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤时的肾功能损害和肾组织病理损伤;(2)Nrf2/HO-1信号通路参与了大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤时肾组织保护机制。PHC预先给药可通过激活肾组织内Nrf2/HO-1信号通路，减轻肾组织内肌红蛋白和亚铁血红素的蓄积，从而减轻了大鼠横纹肌溶解导致的急性肾损伤;(3)内质网应激(ERS)介导的细胞凋亡参与了大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤的病理生理过程。PHC预先给药可通过抑制肾组织ERS，减轻ERS途径介导的肾细胞凋亡，从而减轻了大鼠横纹肌溶解导致的急性肾损伤。

目录

声明

摘要

前言

参考文献

第一部分 盐酸戊乙奎醚预先给药对大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 盐酸戊乙奎醚预先给药对大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤时Nrf2／HO-1信号通路的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第三部分 盐酸戊乙奎醚预先给药对大鼠横纹肌溶解致急性肾损伤时细胞凋亡的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

文献综述 横纹肌溶解致急性肾损伤临床研究进展

附录

攻读学位期间发表文章情况

致谢