逆转录病毒载体介导的PF4及其改构体p17-70抗血管新生基因治疗肿瘤的研究

摘要

该文旨在通过研究全长PF4和PF4氨基末端改构体——p17-70基因的抗血管新时期生的作用,探索其结构与功能的关系.该研究结果显示全长PF4与p17-70均具有选择性抑制血管内皮细胞增殖作用.体内实验结果证明PF4及p17-70均可通过抗血管新生而产生抑制肿瘤生长的作用.裸鼠KB移植瘤模型具有研究抗血管新作用的价值.通过靶向性抗肿瘤组织中血管新生的基因治疗,逆转录病毒载体介导的PF4及p17-70具有明显抑制肿瘤生长的作用,进一步阐明了PF4结构与功能之间的关系,为PF4及其相关多肽的临床应用提供了理论根据,说明PF4抗肿瘤血管新生的基因治疗具有应用前景.

目录

缩略词表

前 言

实验材料

1菌株和质粒

2细胞系和实验动物

3限制性内切酶及修饰酶

4其它主要实验材料

5主要溶液配制

6实验仪器

第一部分重组逆转录病毒载体的构建和鉴定

一、实验方法

1.逆转录病毒介导人PF4全长及P17-70基因靶向实体瘤新生血管的基本路线

2.人PF4及其相关多肽P17-70基因逆转录病毒载体的设计与构建

二、实验结果

1.表达人PF4基因及p17-70基因的逆转录病毒载体构建

2PF4DNA序列测定结果

第二部分产病毒细胞系的建立和病毒上清转导体细胞

一、实验方法

1.细胞培养

2.细胞传代及冻存

3.细胞复苏

4.受体细胞的筛选

5.产病毒细胞系的建立

6.病毒上清感染KB细胞

7.PCR，RT-PCR和Western印迹分析实验检测人PF4及其相关多肽P17-70DNA在转导的细胞基因组中的整合和目的基因的分泌型表达

二、实验结果

1.逆转录病毒的包装、收获及滴度测定

2.逆转录病毒体外感染人头颈部癌KB细胞

3.PF4和p17-70基因在PA317细胞和KB细胞中表达的鉴定

第三部分重组目的基因的体内外功能实验

一实验方法

1.重组目的基因的体外功能实验

2.重组目的基因的体内功能实验

二、实验结果

1.病毒重组体的体外实验结果

2.病毒重组体的体内实验结果

讨 论

小结与结论

参考文献

综述

致 谢

在读博士研究生期间发表论文