抗CD22抗体HIB22体外生物学功能的研究及其单链抗体的质粒构建

摘要

初步研究小鼠源性抗CD22单克隆抗体HIB22体外的生物学功能。利用现有小鼠HIB22杂交瘤制备HIB22单链抗体(ScFv)，为进一步阐明血液系统恶性肿瘤的发病机制提供有利证据，探讨改进NHL靶向治疗的方法。 研究方法： 本课题选用非何杰金淋巴瘤相应细胞系及正常人周血单个核细胞(PBMN)作为研究对象，进行了以下几方面的工作： (1)抗CD22抗体HIB22对NHL细胞系Daudi，Raji抑制增殖、促进凋亡等生物学特性的影响。 (2)抗CD22抗体HIB22对常人周血细胞CD25表达，集落生长等生物功能的影响。 (3)共聚焦显微镜下观察HIB22对CD22分子内化的影响。 (4)RT-PCR的方法克隆小鼠杂交瘤HIB22的抗体基因轻、重链可变区基因，利用overlap-PCR方法构建HIB22-ScFv融合基因，定向克隆入原核表达载体pET22b+，构建重组质粒pET22b/HIB22-ScFv。将重组质粒转染入Rossetta gami感受态菌株。 实验结果: (1)抗CD22抗体HIB22作用于NHL细胞系Daudi，Raji，与对照组相比对其生长有明显抑制作用，MTT法测OD值Raji(0.659VS 0.772)，Daudi(0.53VS0.64)，而对CD22表达阴性细胞系HPB-ALL的增殖无抑制(0.70VS0.69)(P值均<0.05)。 (2)抗CD22抗体HIB22与NHL细胞系Daudi共培养24小时后与对照组相比能够明显诱导Daudi细胞的早期调亡。(HIB22组平均值32.39％VS对照组15.91％)。 (3)PWM刺激后，抗CD22抗体HIB22与正常人PBMNCs共培养，经流式细胞术检测，HIB22可以抑制PWM刺激的B淋巴细胞激活(CD25<'+>/CD19<'+>双阳性细胞的比例，HIB22组平均值1.88％VSPWM刺激组3.52％)(P值均<0.05)。HIB22能够抑制PWM引起的PBMNCs集落形成。 (4)扩增HIB22重链可变区基因363bp，HIB22轻链可变区基因340bp。overlap-PCR构建包含linker的HIB22ScFv单链抗体融合基因，全长为747bp，经酶切转入pET22b+质粒，构建pET22b(+)/HIB22-ScFv。 结论： (1)HIB22能够有效抑制NHL细胞系Daudi，Raji的增殖。 (2)HIB22能够诱导NHL细胞系Daudi的早期凋亡，抑制原癌基因C-myc的早期扩增。 (3)HIB22能够抑制美洲商陆对正常人周血单个核B细胞激活，对CD4<'+>/CD25<'+>T细胞及CD8<,+>/CD25<'+>T细胞有一定影响，并且抑制美洲商陆刺激的正常人周血单个核细胞的集落生长。 (4)HIB22与CD22结合后能够使抗原抗体复合物内化。

目录

引言

第一部分抗CD22抗体HIB22对淋巴瘤细胞系及正常人周血单个核细胞生物学特性的影响及其作用机制的研究

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分HIB22单链抗体融合基因的构建

一、实验方法

二、实验结果

讨论

结论

参考文献：

综述：CD22分子的功能及在NHL靶向治疗中的应用

附录

致谢

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