一、Spike蛋白来源B细胞表位多肽及抗体在SARS冠状病毒感染中作用机制研究;二、EV71病毒基因工程亚单位疫苗的制备及鉴定

摘要

严重急性呼吸综合征(severeacuterespiratorysyndromeSARS)是由SARS冠状病毒((SARS-CoV)引起的急性呼吸道传染病。SARS传播速度快、范围广、死亡率高，被称为21世纪初最烈性的传染病之一。SARS是由冠状病毒家族的新成员-SARS冠状病毒(SARS-Co均引起，它既不是任何一种己知冠状病毒的突变体，也不是己知冠状病毒的重组体，是一种未知的冠状病毒。该病病死率较高，尤其是65岁以上的老人可超过50％'02oSARS病毒作为一种新的冠状病毒，其毒力远远超过其它己知的家族成员，目前尚无有效治疗SARS的抗病毒药物。人们普遍认为，研制一种安全有效的疫苗、开展人群免疫预防是阻止SARS再次流行最有效的方式。目前，己出现多种有发展前景的SARS-CoV疫苗形式，包括灭活病毒疫苗、基于SARS-CoV结构蛋白制备的DNA疫苗、活病毒载体疫苗等，表位疫苗是近年来新近发展起来的疫苗形式，安全性好，诱导的免疫反应针对性强。在我们的研究中，利用SARS-CoVSpike蛋白来源B细胞表位多肤及其产生的单克隆抗体在SARS-CoV感染细胞及体内的过程中进行作用，对其作用效应加以描述，同时对其作用机制加以探讨，以期对SARS-CoV疫苗的研制工作提供有力的科学依据。本研究中，我们首先在体外利用SARS-CoVSpike蛋白来源的四种B细胞表位多肤所产生的单克隆抗体在SARS-CoV感染Vero-E6细胞时进行作用，在筛选得到对病毒感染有中和作用抗体的同时，发现其中邮(s97zs)多肤所制备的单克隆抗体S(s97-s2s3-3-14在病毒感染的过程中表现出随抗体浓度增加而细胞受感染增强的现象。随后我们对四种多肤进行不同组合，先后免疫了h-ACE2转基因C57小鼠及恒河猴，经检测动物体内特异性抗体达到稳定水平后，进行SARS-CoV感染，分别于攻毒后2天与6天时间点安乐动物，观察SARS-CoV作用靶器官肺组织的病理学变化及肺组织内SARS-CoV载量，发现仍然是邮(597-625)多肤免疫的C57小鼠或恒河猴攻毒后在肺组织病理学改变上表现出严重的肺间质性肺炎症状，病毒载量较对照组及其它免疫组增加。根据该实验结果，我们又设计应用高、低两组浓度的S(sm-62s)43-3-14抗体静脉注射于恒河猴体内，攻毒后仍选择相同的时间点安乐恒河猴观察病理学变化及肺组织的SARS-CoV载量，发现肺组织病理性损伤程度及病毒载量随抗体浓度的升高而增加，说明S(s92s)43-3-14抗体在体外及体内都可以增强SARS-CoV的感染。本研究提示，在病毒感染过程中，可能存在一种通过抗体介导的独立于Fc片段受体之外的非经典ADE机制，当体内已经存在抗体或抗体结合力较低的情况下，这种ADE现象可以减弱、平衡掉其它中和抗体的作用甚至增强病毒的感染。尽管ADE的作用机制未被完全阐明，但是这种作用可被认为是研发预防各种感染的疫苗的一个最大障碍，而我们的研究将为SARS-CoV疫苗的研究及评价提供严谨有力的科学依据。

目录

第一部分 Spike蛋白来源B细胞表位多肽及抗体在SARS冠状病毒感染中作用机制研究

Abstract

前言

材料与方法

结果

讨论

第二部分 EV71病毒基因工程亚单位疫苗的制备及鉴定

Abstract

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

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