IgG亚型及其在系统性红斑狼疮和类风湿关节炎中的意义研究以及病毒与人类基因组的比对

摘要

本文从以下几部分展开： 第一部分定量检测人血清IgG4双抗体夹心ELISA方法的建立 目的：正常人血清中IgG4(Immunoglobulin G4)含量很低，但是在某些病理条件下IgG4浓度却会大幅度增高，因此检测IgG4浓度具有重要的临床意义。本研究拟建立—灵敏、快捷的定量检测人血清IgG4浓度的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme—linked immunosorbent assay，ELISA)方法。 方法：用鼠抗人IgG4单克隆抗体包被聚苯乙烯微孔板，以识别并结合待测标本中的人IgG4，辣根过氧化酶(horseradish peroxidase，HRP)标记的兔抗人IgG检测IgG4。用棋盘滴定法确定双抗体夹心ELISA最佳反应条件。纯化的人IgG4作标准品系列稀释液，在已包被鼠抗人IgG4单克隆抗体的固相板中加入IgG4标准品(或待测样本)，反应、洗涤后，加入酶标兔抗人IgG抗体，反应、洗涤后，板上形成鼠抗人IgG4单抗—IgG4—兔抗人IgG—HRP复合物，加底物显色，用酶标仪在450/620 nm波长测定OD值，绘制标准曲线，根据标准曲线查出标本中IgG4含量。并从灵敏度、精密度、相关性等方法学上考察所建立的ELISA检测体系。 结果：用棋盘滴定法确定双抗体夹心ELISA最佳反应条件如下：抗体包被浓度2μg/mL，酶标抗体稀释度1：2000，在此条件下做标准曲线。结果表明，当IgG4的浓度在8μg/L～512μg/L时，IgG4标准品浓度值的自然对数值与OD值之间具有良好的线性关系，回归方程y=0.6027x—1.023(R2=0.9971)。对建立的ELISA系统进行方法学考察，线性检测范围8μg/L～512μg/L，灵敏度为5.95μg/L，批内精密度7.32％～10.36％，批间精密度10.01％～14.19％。检测统性红斑狼疮患者血清IgG4浓度，与市售试剂盒的相关性良好(r=0.854)。 结论：成功建立了一种可用于检测人血清IgG4浓度的双抗体夹心ELISA方法。 第二部分系统性红斑狼疮、类风湿关节炎患者血清IgG亚型的定量检测 目的：探讨系统性红斑狼疮、类风湿关节炎与血清IgG(Immunoglobulin G)亚型水平改变的关系。 方法：用免疫散射比浊法测定72例类风湿关节炎患者血清、105例系统性红斑狼疮患者血清中IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的浓度。这些患者根据疾病活动程度分为活动期组和非活动期组。同时检测45例健康人的血清作为对照。 结果：105例系统性红斑狼疮患者血清IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的浓度用中位数(第5，95百分位数)表示分别为12200(5281，21800) mg/L，5890(1487，13040) mg/L，865(199.4，1916) mg/L，202(68.100，1320) mg/L；72例类风湿关节炎患者血清IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的浓度分别为10150(4769，21085)mg/L，6495(2368，11640) mg/L，814.5(344.8，1264) mg/L，365.5(72.85，1377.5) mg/L；45例正常对照血清IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的浓度分别为5840(3439，10056) mg/L，3590(1575，6167) mg/L，658(204，916.6) mg/L，248(68.100，672.1) mg/L。系统性红斑狼疮患者血清IgG1、IgG2和IgG3浓度与对照组相比显著增高(P<0.001)，IgG4浓度与对照组无显著差异(P>0.05)；根据疾病活动程度分为疾病活动期组和非活动期组时，非活动期组IgG3浓度降低(差异有统计学意义，P<0.05)，其余三个亚型无统计学差异(P值>0.05)。类风湿关节炎患者血清各IgG亚型浓度明显高于健康对照组(差异有统计学意义，P<0.001)；活动期组与非活动期组各IgG亚型浓度无统计学差异(P>0.05)。 结论：在系统性红斑狼疮疾病中，IgG1、IgG2、IgG3浓度显著增高，说明这些IgG亚型参与了疾病免疫病理过程，非活动期与活动期相比IgG3的浓度降低，说明IgG3自身抗体在系统性红斑狼疮发病期起主要的致炎症作用。在类风湿关节炎疾病中，各IgG亚型浓度与健康对照组相比明显增高，说明各IgG亚型均参与类风湿关节炎免疫病理过程。 第三部分病毒与人类基因组序列相似片段 目的：人与病毒接触通常不会感染疾病。一部分病毒可以致病，但是，这些疾病所致的大部分病理症状并不是由病毒本身引起的，而是由于人的免疫系统清除病毒而造成的副作用。在人和病毒长期的相互作用下，他们的基因组之间可能存在相似的部分，这可能与病毒感染人类有生物学的联系。本研究的目的是探讨病毒与人基因组之间是否存在相似序列。 方法：人类基因组的发布，使得我们可以对病毒和人的基因组进行比对。我们利用美国国立生物信心中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)的平台，使用基本局部搜索工具(Basic Local Alignment Search Tool，BLAST)对病毒和人的基因组序列进行比对。对比的病毒包括多种DNA病毒和RNA病毒。 结果：我们发现所有比对的病毒都含有不同数目的序列片段与人基因组序列片段完全相同。DNA病毒或者基因组较大的病毒往往比RNA病毒含更多的相同序列；对同一种病毒，亚型不同，所含的相同片段数目也不同。这些相同的序列片段长度都在20-30 nt之间，有些片段在人基因组不同位置多次出现。这些片段在人的基因组中有的正向排列，也有的负向排列。大部分相同序列片段位于人的基因编码区之间，有些位于人的基因编码区，少数位于基因非编码区。对包含相似序列的人类基因进行研究，发现大部分基因的与新陈代谢有关。这些基因编码酶、结合蛋白、转运蛋白，参与DNA复制和细胞代谢。 结论：根据序列比对结果，我们提出一个假说：在人类与病毒漫长的相互作用过程中，病毒将它们的基因片段带入到人的基因组中。人和病毒都可能利用这些相同序列得以更好的生存。这在这个过程中，病毒扮演着一个将外来生物信息带入人类基因组的角色。

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文摘

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论文说明：英文缩略语表

声明

第一部分 定量检测人血清IgG4双抗体夹心ELISA方法的建立

1材料与方法

2结果

3讨论

4参考文献

第二部分 系统性红斑狼疮、类风湿关节炎患者血清IgG亚型的定量检测

1材料与方法

2结果

3讨论

4参考文献

第三部分 病毒与人类基因组序列相似片段

1材料与方法

2结果

3讨论

4参考文献

全文结论

论文综述 IgG亚型及其在自身免疫疾病中的意义

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