趋化性细胞因子CCL18对黑素瘤细胞系生物学行为影响的研究

摘要

皮肤恶性黑素瘤是一种高度恶性肿瘤，目前研究认为任何细胞都能分泌细胞因子并表达其受体，而细胞因子在肿瘤细胞的表达已引起广泛的关注和研究，它们是肿瘤细胞侵袭转移的路标。部分黑素瘤细胞系能产生细胞因子并表达其受体，无论阻断配体还是受体都能抑制肿瘤细胞的生长。我们的前期研究，采用全人类基因组芯片对中国人肢端黑素瘤组织的研究发现，趋化性细胞因子CCL18在肿瘤组织的表达明显增高。本研究利用IL-4诱导人单核细胞产生的CCL18、重组CCL18细胞因子与A375黑素瘤细胞株共培养，探讨其在黑素瘤生物学行为方面的作用。
　　 第一部分：人单核细胞的分离、诱导及CCL18表达的检测
　　 使用密度梯度离心法成功分离人单核细胞，并使用IL-4成功诱导单核细胞，经ELISA和Western-blotting验证，诱导的单核细胞可产生CCL18，非诱导的单核细胞不能产生CCL18。
　　 第二部分：CCL18细胞因子对A375黑素瘤细胞株增殖、转移及血管增殖的影响
　　 诱导人单核细胞产生CCL18，与重组人CCL18细胞因子，分别与A375黑素瘤细胞株共培养，通过MTT法检测CCL18对A375增殖的影响；通过趋化试验及重组基底膜侵袭实验，测定CCL18对肿瘤细胞的趋化能力及侵袭作用；通过将A375黑素瘤细胞株接种于鸡胚尿囊膜，测定不同情况下CCL18对肿瘤血管生成的影响。结果提示无论是诱导还是重组CCL18细胞因子都不是影响肿瘤增殖的主要细胞因子，IL-4诱导产生CCL18的单核细胞组及CCL18重组细胞因子组与对照组比较均对肿瘤细胞存在趋化作用，并促进肿瘤细胞的转移；IL-4诱导组及重组CCL18组在鸡胚尿囊膜试验中可促进肿瘤血管的生成作用。
　　 第三部分：CCL18细胞因子对A375黑素瘤细胞裸鼠内成瘤作用的影响
　　 裸鼠成瘤的模型显示，CCL18细胞因子可能以某种机制抑制A370移植瘤体积的增加。肿瘤组织切片经Ki-67、Bcl-2免疫组化染色及TUNEL原位凋亡染色后分析，发现诱导及重组CCL18在A375黑素瘤细胞系体内试验中可促进肿瘤的增殖，抑制肿瘤细胞的凋亡。
　　 第四部分：免疫组化研究CCL18在皮肤恶性黑素瘤的表达
　　 使用免疫组化对67例黑素细胞来源的良、恶性肿瘤进行分析，结果显示良性痣、Spitz痣及发育不良性痣不表达CCL18，而黑素瘤表达CCL18，且CCL18的表达与肿瘤浸润深度呈正比。
　　 第五部分：小结
　　 CCL18可能与黑素瘤的进展有关，并调节肿瘤的生物学行为。但需要更多研究以明确其作用机制及功能。