2010年昭通地区婴幼儿腹泻轮状病毒分子流行病学调查及人轮状病毒野毒株分离的初步研究

摘要

轮状病毒是全世界范围内引起婴幼儿重症腹泻的最主要原因之一。全世界5岁以下的儿童几乎都被轮状病毒感染过至少一次。全球每年仍有大约500，000年龄小于5周岁的死于轮状病毒的感染，这一数字占全球因腹泻死亡儿童总数的37％，占全球儿童总死亡人数的5％。轮状病毒感染已经成为严重的全球公共卫生问题，给世界各国带来沉重的疾病负担和经济负担。世界卫生组织对于在全球范围内爆发和流行的轮状病毒给予了高度的重视，建立了卫生组织协调的全球轮状病毒监测网络来监测和报道轮状病毒在全球的流行趋势。对于疾病的预防和控制，研究其流行病学特征具有十分重要的意义。 本研究对云南昭通地区2010年秋冬季发生的婴幼儿腹泻粪便样品进行了分子流行病学调查。 实验应用胶体金法，逆转录聚合酶链式反应及PAGE电泳等方法，对2010年9月至12月从云南省昭通市第一人民医院采集的101份婴幼儿腹泻粪便样品进行轮状病毒抗原检测，并对部分样品中轮状病毒VP7基因进行测序分析及基因型分型，使用MEGA4软件构建系统进化树。结果显示，腹泻患儿排泄物中轮状病毒抗原阳性比例为52.5％(53/101)，均为人A组轮状病毒。通过对测序成功的28份轮状病毒基因序列分析，发现其中有13份G1型RV，11份G3型，G4型和G2型RV各鉴定出3份和1份。核苷酸同源性分析显示检测样品中轮状病毒VP7序列与国内、区域内发现的流行株基因序列有较高的相似性。 另外，从51份阳性样品中挑选取编号为5T的粪便样品进行病毒分离实验。通过在MA104细胞上的适应性培养，分离获得一株轮状病毒野毒株(ZTR-5)。通过蚀斑筛选获得纯化的ZTR-5毒株。毒株在MA104细胞中连续培养10代，其感染性滴度达到了7.90 log CCID50/ml左右。通过PAGE电泳病毒基因组和RT-PCR特异扩增VP7基因测序对比证明了ZTR-5毒株的遗传稳定性。在电子显微镜下观察到典型的病毒颗粒。进行了ZTR-5毒株病毒组基因组全基因测序，得到了ZTR-5毒株全面的基因信息。 结论:2010年昭通地区秋冬季婴幼儿腹泻的主要病原体为人A组轮状病毒，基因分析显示G1、G3型为主要流行型，与国内发现的流行株基因序列有高度相似性。分离的人轮状病毒ZTR-5株已获得良好的组织培养适应，经10代培养未发现病毒基因组变异。ZTR-5株基因分型为G3型。这项研究为轮状病毒疫苗的研制提供了重要科学依据。

目录

摘要

前言

第一部分 云南昭通地区2010年秋冬季婴幼儿感染轮状病毒分子流行病学调查

一、实验材料及方法

二、实验结果

三、讨论

四、小结

第二部分 轮状病毒野毒株ZTR-5的分离培养与鉴定

一、实验材料与方法

二、实验结果

三、讨论

四、小结

参考文献

附录

一、缩略语及符号意义

二、主要溶液及配方

攻读学位期间发表文章情况

致谢

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