冬青属药用植物条形码研究

摘要

冬青属(Ilex L.)是冬青科4个属中我国仅有的一个属，该属全世界约有400余种。我国约有200余种，分布于秦岭以南及长江流域以南各省区。由于冬青属药用植物种类繁多，长期以来受到杂交及环境条件等影响，产生了各种变异，传统的鉴定方法很难从本质上真正的将其属内植物进行区分。因此急需一种有效的鉴定方法对此类亲缘关系较近的物种进行区分。 本文先对冬青属植物相关的文献报道进行较全面综述，包括化学成分、传统功效以及药理活性等，以期能够更全面更合理地探讨其属内亲缘学关系。 DNA条形码技术是利用一段相对通用、有足够变异、易扩增且相对较短的DNA片段来实现对物种的快速成功鉴定。首先，本实验选取了ITS2、psbA-trnH、matK、ITS、trnL-F一共五组候选序列。选取冬青属40个样本，对其进行扩增测序后得出扩增成功率为ITS2＞ psbA-trnH＞trnL-F＞ ITS＞matK;测序成功率为ITS2＞trnL-F＞psbA-trnH＞ ITS＞matK。ITS2的扩增率及测序成功率均为最高且高于90％。将其作为鉴别冬青属药用植物的最佳片段。 然后，采用ITS2序列来鉴定冬青属植物，考察其在亲缘关系较近的种间及种内样本间的鉴定效率。选取冬青属共68份样本，包括36种冬青属植物，提取其总DNA并扩增出ITS2序列，经测序后进行序列拼接，得到64个样本的ITS2序列。数据分析结果表明，得到注释后的ITS2序列为299bp，其中含有119个信息位点。通过网站预测其二级结构信息，作为辅助参考工具。 最后，利用MEGA5构建最大简约树及邻接树，将树图同传统形态学分类进行对比后可知，结果与传统分类学上基本相符。证明ITS2序列能够有效的将冬青属药用植物鉴定区分。

目录

声明

缩略语及术语简表

摘要

第一部分 文献综述

第一章 冬青属药用植物亲缘学概况

第一节 冬青属药用植物的分类学研究概况

第二节 冬青属药用植物的传统疗效

第三节 冬青属药用植物的化学成分研究进展

第四节 冬青属药用植物现代药理作用及活性成分间的联系初探

第五节 本章小结

第二章 DNA条形码技术

第一节 DNA条形码定义及原理

第二节 DNA条形码筛选标准

第三节 DNA条形码鉴定分析方法

第四节 DNA条形码鉴定物种的优势

第三章 本实验研究意义

参考文献

第二部分 冬青属植物条形码候补片段的研究

第一章 冬青属植物条形码候补片段的选取

1 matK

2 trnH-psbA

3 trnL-F

4 ITS

第二章 冬青属植物条形码候补片段的实验

1 实验材料、仪器及试剂

2 实验方法

3 实验结果

第三章 冬青属药用植物条形码候选片段效率分析

第一节 冬青属植物基因组DNA提取结果分析

第二节 冬青属植物DNA条形码候选序列鉴定效率分析

第三部分 基于ITS2序列的冬青属药用植物分子鉴别

第一章 ITS2序列特点及应用

第二章 冬青属药用植物ITS2序列鉴定研究

1 实验材料、仪器及试剂

2 实验方法

3 实验结果

第三章 基于ITS2序列的冬青属药用植物分子鉴定结果分析

第一节 ITS2序列特点研究结果

第二节 冬青属药用植物基于ITS2序列鉴定研究结果

参考文献

第四部分 总结与展望

附图

致谢

作者简历及发表文章情况