狼疮抗凝物测定方法的优化选择及生物变异度研究

摘要

本论文共分为两个部分，对狼疮抗凝物(LA)的实验室检测标准化进行了探讨。
　　第一部分完成了基于两个途径的狼疮抗凝物检测方法:改良蝰蛇毒磷脂时间试验(dRVVT)和硅凝固时间法(SCT)的性能验证，以及根据ISTH2009,BCSH2012和CLSI2014(H60)三个狼疮抗凝物检测指南，建立APTT(APTT Actin、APTT ActinFSL和APTT-Synthil)，dRVVT和SCT五种不同LA检测试剂及循环抗凝物指数(ICA)、纠正百分比(％C)、标准化比值(NR)等结果表示方法的参考范围(RI)/Cut-off值，比较不同RI/Cut-off值的敏感性和特异性并评估其临床应用，以期为临床提供可靠的检测结果。目前国内外尚无关于dRVVT和SCT性能验证的文献报道。按照CLSI EP5-A2，EP6-A2，EP9-A2文件及《卫生部临床血液学检测常规项目分析质量要求WS/T406-2012文件》标准，对两种狼疮抗凝物检测方法精密度、携带污染率、样本稳定性、方法学比对及参考范围建立进行全面评估。同时验证了乏血小板血浆中血小板计数和样本稳定性。50例乏血小板血浆中血小板计数为(0-9)×109/L，满足指南＜10×109/L要求。两种抗凝物检测方法在四个时间点检测结果间P值＞0.05，差异无统计学意义。两种试剂批内精密度为0.79％-2.35％，小于2.50％。dRVVT试验批间精密度为2.76％-3.53％，SCT试验批间精密度为6.23％-7.02％。所有检测方法携带污染率绝对值＜3.00％。dRVVT和SCT标准化比值计算所得RI/Cut-off值分别为1.24和1.16。不同仪器同种方法，和相同仪器不同方法之间比对数据相关良好，相关系数＞0.900。两种检测方法标准化比值之间差异无统计学意义，同时两种方法阴阳性判断间差异无统计学意义。dRVVT和SCT两种狼疮抗凝物检测方法适用于临床样本检测。
　　三种APTT试剂ICA对LA检测的敏感性均低于55.0％，APTT试剂中，APTT-SS（二氧化硅激活）阳性似然比大于鞣花酸为激活剂的APTT试剂。同样为鞣花酸激活剂的APTT试剂，Actin FSL高于Actin。dRVVT三种结果表示方法的敏感性分别为70.3％～93.1％，SCT三种结果表示方法的敏感性分别为55.4％～79.2％。除外APTT-Actin和SCT试剂ICA（RI/Cut-off值为第97.5百分位数），其余试剂的特异性均大于90.0％。以dRVVT检测结果1.17～1.50为弱阳性判断标准，两种以鞣花酸为激活剂的APTT试剂敏感性均低于16.0％，dRVVT以第97.5百分位数为RI/Cut-off值的敏感性最高为71.2％。APTT-SS在各疾病组中均具有较高阳性率，dRVVT标准化比值及其组合在抗磷脂综合征(APS)中阳性率最高。APTT-SS和1∶1混合试验在凝血因子缺乏(FD)中阳性率分别为92.5％和7.5％。SCT在FD、口服抗凝剂(OAT)和健康人群(HS)中阳性率为0。传统的筛选试验-1∶1混合试验-确证试验和标准化比值均与血栓形成相关，比值比(OR)值在4.400-5.667之间。dRVVT和SCT标准化比值与血栓形成OR值大于其他试验流程。1∶1混合试验因为稀释效应对弱阳性LA检测能力不足，但能有效区分APTT延长是否由凝血因子缺乏导致。筛选试验-1∶1混合试验-确证试验和标准化比值均与APS患者血栓形成相关。
　　本次研究结果显示，dRVVT标准化比值具有最佳临床诊断效能。同时，LA检测结果的解释需同时考虑患者分析前因素。
　　本研究的第二部分旨在调查血栓与止血特殊检测项目狼疮抗凝物(LA)、蛋白S(PS)、蛋白C(PC)、抗凝血酶(AT)和血管性血友病因子抗原(vWF∶Ag)的生物学变异。采集25例健康成年人（男性13例，女性12例，年龄25-40岁）在研究第1天，第3天和第5天的8:00、12:00和16:00共9个时间点采集枸橼酸盐抗凝静脉血，同时收集健康成年人正常血浆，分别检测上述5个项目。LA结果以dRVVT筛选（秒），dRVVT筛选比率(R)和标准化dRVVT比率(NR)三种形式表示。计算分析变异(CVA)，个体内变异(CVw)和个体间变异(CVG)，分析一天内和一周内各采血时间点结果是否存在差异，并计算个体指数(Ⅱ)及参考范围变化值(RCV)。PS，PC，AT-Ⅲ，vWF∶Ag，dRVVT筛选（秒），dRVVT筛选比率(R)和标准化dRVVT比率(NR)的CVA均小于1/2CVw，CVw分别为4.59％-7.45％，CVG分别为4.28％-31.71％。vWF∶Ag的CVw(5.84％)和CVG(31.71％)略高于文献数据，与受试者人群ABO血型分布有关，进一步强调vWF∶Ag应根据血型建立非O型和O型两个参考范围。同一天内不同时间点和天间采血结果间方差分析P值为0.065～0.922(P＞0.05)，差异无统计学意义。5个项目个体指数(Ⅱ)结果为0.18～0.71，提示上述5个凝血参数主要用于观察疾病进展或判断预后。
　　本研究首次得出了中国人群PS，PC，AT-Ⅲ，vWF∶Ag和LA的生物学变异数据，其中LA生物变异度数据为国内外第一次报道，弥补了数据库的不足。

目录

摘要

第一部分 狼疮抗凝物测定方法优化选择的探讨

研究一 狼疮抗凝物检测方法性能验证

摘要

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

研究二 不同的狼疮抗凝物检测试验的临床诊断效能研究

摘要

前言

对象和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 狼疮抗凝物等血栓与止血特殊项目的生物学变异研究

摘要

前言

对象和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 论文综述 狼疮抗凝物实验室检测

致谢

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