多发性骨髓瘤髓外病变患者MYC激活的预后意义及其分子机制探讨

摘要

目的:
　　多发性骨髓瘤(MM)是一种恶性血液系统肿瘤，髓外病变(EMD)是其表现形式之一，往往提示预后不良。EMD患者的预后有很大异质性，其发病机制、危险因素并不明确，细胞遗传学异常是目前研究的热点。MYC是重要的原癌基因，基因重排常见于高度侵袭性肿瘤，近年来发现其异常与MM疾病进展相关，可被Muc1、Pyk2等基因激活，但MYC在EMD和MM预后中的意义目前仍缺乏大宗报道。本研究主要目的:(1)研究MYC异常及蛋白表达水平与EMD的相关性，探讨其在MM中的预后意义。(2)比较EMD及孤立性浆细胞瘤(SP)患者的细胞遗传学异常，探讨浆细胞克隆演变在EMD发生中的作用。(3)利用骨髓瘤细胞系体外研究Pyk2和Muc1对MYC的影响，探究髓外病变中MYC激活的可能机制。
　　方法:
　　研究纳入北京协和医院2008年1月至2015年11月初诊的患者。采用病例对照分析方法收集髓外病变(EMD)和非髓外病变(nonEMD)患者，荧光原位杂交(FISH)方法研究骨髓悬液MYC异常;免疫组织化学(IHC)方法研究骨髓病理标本中Myc、Muc1、Pyk2蛋白表达情况。选取EMD患者髓外浆细胞瘤病理标本，以同期经北京协和医院病理科诊断的孤立性浆细胞瘤标本(SP)作为对照，FISH方法研究其MYC异常，1q21扩增、8p21缺失、RB1缺失、D13S319缺失、P53缺失、IGH重排，IHC方法研究Myc、Muc1、Pyk2蛋白表达情况。体外研究采用MM细胞系U266、RPMI8226及浆细胞白血病(PCL)细胞系NCI-H929，研究Myc抑制剂、Pyk2抑制剂和硼替佐米对细胞增殖、凋亡和侵袭性的影响。
　　结果:
　　1.对65例nonEMD患者和42例EMD患者的初诊骨髓标本检测MYC重排及Myc、Muc1和Pyk2蛋白表达情况。两组患者总生存期(OS)存在显著差异（未达vs24月，p=0.021）。MYC重排在nonEMD组和EMD组发生率分别为20.0％和33.3％(p=0.121)，在非骨旁EMD中发生率(42.3％)(p=0.029)，MYC重排和1q21扩增双阳性在nonEMD组和EMD组发生率分别为6.2％和23.8％(p=0.025)。MYC重排阳性者中位生存期为15.4月，MYC重排阴性者中位生存期未达(p＜0.001)。单纯1q21扩增或8p21缺失并不显著降低患者生存，但MYC重排合并1q21扩增或8p21缺失中位生存期显著缩短，分别为11.0月(p=0.001)和11.0月(p=0.010)。多因素分析发现MYC重排阳性为MM预后差的独立危险因素(p＜0.001)。免疫组化结果:新诊断MM患者骨髓Myc高表达在nonEMD组和EMD组分别为15.7％和48.2％(p＜0.001)，Muc1高表达在nonEMD组和EMD组发生率分别为16.3％和35.2％(p=0.030)。在Muc1高表达组Myc表达水平显著升高(34.2％vs20.8％，p=0.010)，Pyk2高表达组Myc表达水平显著升高(29.6％vs18.0，p=0.011)。Myc蛋白表达与基因异常并不完全吻合。
　　2.对32例EMD及14例SP浆细胞瘤病理组织行FISH检测，EMD中MYC重排(46.7％vs14.3％，p=0.038)、1q21扩增(65.5％vs14.3％，p=0.002)、8p21缺失(37.9％vs0％, p=0.008)、RB1缺失(65.5％vs14.3％,p=0.001)、D13S319(58.6％vs21.4％，p=0.022)、P53缺失(37.9％vs0％，p=0.008)、IGH重排(48.3％vs7.1％，p=0.015)发生率均显著高于SP组。大部分EMD患者髓外组织与骨髓组织相比，浆细胞出现新的细胞遗传学异常。Myc蛋白高表达率在EMD组高于SP组(43.3％vs16.7％)，但无显著性差异(P=0.103)。一例MYC阳性的SP组患者最终在两年内进展至活动性骨髓瘤。
　　3.抑制Myc可降低MM细胞的侵袭能力，抑制Pyk2可降低细胞Myc表达水平，降低细胞侵袭能力。
　　结论:
　　EMD患者预后不良，但结局有很大异质性。MYC重排在EMD患者中发生率高，是MM预后不良的独立危险因素。EMD细胞遗传学异常的发生率显著高于SP，且髓外病变具有更多的细胞遗传学异常。Myc表达与细胞侵袭性相关，Muc1和Pyk2可能通过激活Myc造成不良预后。

目录

摘要

引言

材料与方法

一、研究对象

二、试剂及设备

三、实验方法

四、数据处理及统计分析

结果

第—部分 MM患者MYC异常与EMD发生的相关性及其预后意义

一、新诊断MM患者骨髓MYC异常的发生率及其意义

二、髓外浆细胞瘤中MYC异常的发生率及意义

第二部分 多发性骨髓瘤MYC激活的分子机制体外研究

一、细胞系基本特征

二、Myc激活对细胞侵袭和迁移能力的影响

三、Pyk2抑制剂降低Myc表达

四、硼替佐米可降低Myc表达

讨论

一、EMD具有异质性，需要细化危险度分层指标

二、MYC异常表现多样，基因异常和蛋白表达存在差异

三、MYC激活的可能机制

四、MYC重排的FISH检测作为MM常规评估开展的意义

结论

参考文献

附录

综述 MUC1在血液系统肿瘤中的研究进展

致谢

声明