HSV-1衣被蛋白UL7基因的克隆及其在病毒增殖中的表达分析

摘要

单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)是一种危害人类健康的常见病原体，分为HSV-1和HSV-2两种血清型。病毒通过受损皮肤或黏膜感染宿主细胞，在宿主的上皮组织内生长增殖，另一方面，病毒也能进一步从感染的上皮组织的神经末梢入侵到神经元，在初次感染后于三叉神经节、背根神经节等处建立潜伏性感染，并伴随宿主终生。其中，单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virusⅠ，HSV-1)可引起人皮肤、黏膜和神经系统感染，能导致角膜炎、疱疹性脑炎、唇疱疹和龈口炎等疾病。
　　衣被蛋白(也称间层蛋白，tegument protein)在成熟的疱疹病毒颗粒中既以结构蛋白的形式存在，又在病毒的增殖过程中发挥着特定的生物学作用。UL7是HSV-1型疱疹病毒衣被蛋白的编码基因之一，目前国内外对其编码的蛋白进行的研究还不够深入，文献中都报道较少。但是有研究证实，UL7编码基因在疱疹病毒间是高度保守的，作为HSV-1 UL7基因的同源基因，牛疱疹病毒1型(Bovine herpes virus1，BHV-1)和伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)的UL7突变株在细胞中的复制能力受损，只是对其具体机制还不是很了解。同时也有实验表明，HSV-1型疱疹病毒的UL7与UL51通过相互作用，参与病毒感染细胞的过程。
　　基于对UL7蛋白的初步了解，为了更加系统地研究UL7蛋白在HSV-1型疱疹病毒增殖过程中的功能意义，本课题做了以下工作:提取了HSV-1的基因组，并用PCR方法扩增了UL7基因片段，构建原核表达质粒pGEX-5X-1-UL7，转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达，获得并纯化GST-UL7重组蛋白，将其作为抗原免疫ICR小鼠制备抗UL7多克隆抗体。用间接法ELISA检测抗体的效价，Western Blot检测抗体的特异性，并使用该多克隆抗体对HSV-1病毒感染Vero细胞后的各时间点UL7蛋白表达量进行检测。实验结果表明，GST-UL7重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达，间接法ELISA检测抗UL7抗体效价可达1∶163840以上。Western Blot实验证明抗UL7多克隆抗体可以特异性识别UL7蛋白。在HSV-1病毒感染Vero细胞后的各时间点均检测到UL7蛋白的表达。通过成功获得GST-UL7融合蛋白，并制备了抗UL7蛋白的多克隆抗体，利用该抗体我们初步确定了UL7蛋白在HSV-1增殖过程中呈持续性表达。

目录

摘要

前言

1 疱疹病毒的基本生物学特征

2 HSV-1的感染与临床症状

3 HSV-1的治疗

4 HSV-1病毒的基因结构及其生物学性状

5 HSV-1的衣被蛋白

实验材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

实验结果与分析

1 HSV-1 8F株的基本特性

2 重组质粒的构建

3 UL7蛋白在原核细胞中的表达与纯化

4 抗UL7蛋白多克隆抗体的制备及特异性鉴定

5 核质分离效果的鉴定

6 抗UL7蛋白抗体应用于HSV-1病毒中UL7蛋白的检测

讨论

小结

参考文献

附录

致谢

研究生简历

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