肺结核患者外周血不同T细胞亚群中免疫记忆性亚型细胞的分布差异

摘要

研究背景：结核病（Tuberculosis, TB）是由于结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）感染引起的慢性传染病，目前在全球范围仍然是最常见和最严重的传染病之一。CD4+T，CD8+T和γδT细胞在抗MTB感染的免疫过程中起了重要作用。T细胞分为初始型T细胞(Tnaive)，中央记忆型 T细胞(Tcm)，效应记忆型 T细胞(Tem)和效应型T细胞(Teff)。Tcm可以归巢到次级淋巴组织，产生大量细胞因子IL-2，少量其他效应分子。Tem产生大量效应性细胞因子，发挥快速的效应功能，并进入外周组织。Teff则产生效应性细胞因子，并发挥细胞毒效应。Vγ9Vδ2 T细胞在人外周血中占大多数，根据其表面表达的分子及效应功能，也可分为初始型，记忆型及效应型等免疫亚型。但肺TB患者外周血不同T细胞亚群中免疫记忆性细胞亚型的数量有何变化尚少报导。
　　目的：观察和分析肺TB患者外周血不同T细胞亚群中免疫记忆性细胞亚型的变化。
　　方法：
　　1．采集健康成人及肺TB患者外周血，加入荧光标记单抗进行表面分子染色(anti-CD45RA-FITC， anti-TCRγδ-APC-Vio770， ani-CD4-APC-Vio77， anti-CD27-APC，anti-Vδ1-PE，anti-Vδ2-PerCP，anti-CD8-PE-Cy7，anti-CD3-BV421， anti-CD27-BV510)。通过CD45RA和CD27将不同T细胞亚群（CD4、CD8、Vδ1、Vδ2和Vδ3-8）中免疫记忆性亚型细胞分为Tnaive（ CD45RA+CD27+）， Tcm（CD45RA—CD27+），Tem（CD45RA—CD27—）和Teff（CD45RA+CD27—）。流式细胞仪检测不同T细胞亚群中的免疫记忆性亚型细胞的分布百分率，比较健康成人和肺TB患者之间的差异。
　　2.采集健康成人及肺TB患者外周血，加入佛波醇酯（PMA）和钙离子霉素（Ionomycin）培养2小时后，再加入莫能霉素（Monensin）继续培养4小时，收集细胞，加入荧光标记单抗进行表面分子和胞内染色（anti-CD45RA-FITC， anti-TCRγδ-APC-Vio770， ani-CD4-APC-Vio77， anti-CD27-APC， anti-Vδ1-PE， anti-Vδ2-PerCP， anti-CD8-PE-Cy7， anti-CD3-BV421， anti-CD27-BV510， anti-IL-17-APC，anti-IFN-γ-APC）。通过CD45RA和CD27将产IL-17或IFN-γ的不同T细胞亚群（CD4、CD8、Vδ1、Vδ2和Vδ3-8）中免疫记忆性亚型细胞分为Tnaive(CD45RA+CD27+)，Tcm(CD45RA—CD27+)， Tem(CD45RA—CD27—)和Teff(CD45RA+CD27—)。流式细胞仪检测产IL-17或产IFN-γ的αβT和γδT细胞亚群中记忆型免疫亚型细胞的分布比例，比较健康成人和肺TB患者之间的差异。
　　结果：1.健康成人和肺TB患者外周血中CD4+T细胞中的Tnaive分别为57.53±13.59和36.49±17.65，（P<0.01）；Tem分别为6.03±3.26和24.44±10.76，（P<0.01）；Teff分别为3.26±4.09和0.75±0.58，（P<0.01）。健康成人和肺TB患者的CD8+T细胞Tnaive分别为63.33±16.63和24.53±17.58，（P<0.01）；Tem分别为6.56±4.25和39.38±18.31，（ P<0.01）；Teff分别为14.60±11.75和24.83±12.90，(P=0.03)。健康成人和肺TB患者的CD4+和CD8+T细胞的Tcm之间无统计学差异，（P>0.05）。
　　2.健康成人与肺TB患者外周血中Vδ1 T细胞和Vδ3-8 T细胞（γδTCR+Vδ1—Vδ2— T细胞）的免疫记忆性亚型细胞的百分率没有统计学差异。健康成人和肺TB患者外周血中Vδ2 T细胞的Tcm分别为77.90±10.60和61.05±22.98，（P=0.048）；Teff分别为2.00±2.21和5.24±2.30，（P<0.01）；而Tnaive和Tem的百分率两组人群间没有统计学差异。
　　3.健康成人和肺TB患者外周血中产IFN-γ的CD4+T细胞的Tem的百分率分别为16.22±3.02和27.33±14.34，（P=0.029）；两组人群中Tnaive、Tcm和Teff的百分率无统计学差异。健康成人和肺结核患者外周血中产IFN-γ的CD8+T细胞的Tcm百分率分别为48.99±13.72和33.66±14.49（P=0.035）；Teff分别为19.57±11.67和42±13.52，(P=0.002)，其余免疫记忆性亚型细胞的百分率无统计学差异。
　　4.健康成人和肺TB患者外周血中产IFN-γ的Vδ1 T细胞中Tnaive的百分率分别为32.03±19.58和14.86±9.98，（P=0.039）；Teff的百分率分别为42.92±28.48和72.58±18.76，（P=0.022）；两组人群中其余免疫记忆性亚型细胞的百分率无统计学差异。产IFN-γ的Vδ2 T细胞免疫记忆性亚群细胞的百分率两组人群间没有统计学差异。产IFN-γ的Vδ3-8 T细胞的Tcm的百分率分别为57.51±19.87和36.13±21.43，（P=0.044），其余免疫记忆性亚型细胞的百分率两组人群间无统计学差异。
　　5.健康成人和肺TB患者外周血中产IL-17的CD4+和CD8+T细胞的不同免疫记忆性亚型细胞的百分率之间没有统计学差异。
　　结论：
　　1.肺TB患者外周血中αβT和γδT细胞的CD4+T，CD8+T以及Vδ2 T亚群的免疫记忆性亚型细胞的分布发生改变。此外，肺TB患者外周血产IFN-γ的αβT和γδT细胞亚群，除Vδ1，Vδ3-8亚群免疫记忆性亚型细胞的分布也发生改变。这一变化可能与机体抗Mtb感染的免疫应答有关，且其改变可能具有保护作用。
　　2.肺TB患者外周血中产IL-17的αβT细胞（CD4+和CD8+T细胞）的免疫记忆性亚型细胞的分布与健康成人没有差异，提示Mtb的感染不能改变其免疫亚型的分布比例。

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中文摘要

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前言

材料和方法

1.研究对象

2. 主要试剂

3 主要试剂的配制

4 仪器和设备

5 实验方法

6 统计学方法

结果

1. 健康成人(HD)与PTB患者外周血αβT细胞中CD4+、CD8+亚群不同免疫亚型细胞的分布

2. HD与PTB患者外周血γδT细胞中Vδ1，Vδ2，Vδ3-8亚群四种免疫亚型的分布

3.HD与PTB患者外周血αβT细胞中产IFN-γ的CD4+、CD8+亚群四种免疫亚型的分布

4. HD与PTB患者外周血γδT细胞中产IFN-γ的Vδ1，Vδ2，Vδ3-8亚群四种免疫亚型的分布

5. HD与PTB患者外周血αβT细胞中产IL-17的CD4+、CD8+亚群四种免疫亚型的分布

讨论

结论

参考文献

附录 A英文缩略词表

附录B常用试剂配制

附录 C个人简历：

附录 D综述:γδT细胞亚群功能、记忆表型和相关细胞因子的研究进展