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北京化工大学学位论文原创性声明
符号说明
第-章文献综述
1.1阳离子抗菌肽简介
1.2抗菌肽的种类
1.2.1哺乳动物抗菌肽
1.2.2植物抗菌肽
1.2.3昆虫抗菌肽
1.2.4两栖类抗菌肽
1.2.5微生物中的抗菌肽
1.2.6抗菌肽的抗菌分子机理
1.2.7抗菌肽的抗菌应用前景
1.3有关的实验技术
1.3.1质粒的提取与纯化
1.3.2 DNA的凝胶电泳
1.3.3基因工程表达系统
1.3.4 PCR技术
1.3.5外源基因转化
1.3.6常用的肽类分析技术
第二章基因转化，his+Muts表型菌株和高拷贝菌株的筛选
2.1研究方案
2.2试验材料
2.2.1菌种
2.2.2试剂
2.2.3仪器设备
2.3试验操作
2.3.1重组质粒pPIC9-Atmp的提取
2.3.2重组质粒pPIC9-Atmp的纯化和线性化处理
2.3.3电穿孔转化
2.3.4筛选阳性克隆
2.4结果与分析
2.4.1 his+Muts表型菌株的筛选结果
本章小结
第三章目的蛋白的诱导表达与分析
3.1试验材料
3.1.1试剂
3.1.2仪器设备
3.2试验操作
3.2.1阳离子抗菌肽的诱导表达
3.2.2 Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳
3.2.3蛋白表达量的测定
3.3结果与讨论
3.3.1电泳结果
3.3.2蛋白表达量的测定结果
本章小结
第四章重组蛋白体外抑菌活性研究和部分发酵条件优化
4.1试验材料
4.1.1菌种
4.1.2试剂
4.1.3仪器设备
4.2试验操作
4.2.1重组阳离子抗菌肽发酵上清液的体外抑菌活性检验
4.2.2重组阳离子抗菌肽发酵上清液的体外抑菌活性和Amp的比较
4.3摇瓶发酵部分发酵条件的优化
4.3.1不同生长培养基的选择
4.3.2生长培养基初始pH对工程菌体生长的影响
4.3.3生长时间对工程菌生物量的影响
4.3.4诱导时间对阳离子抗菌肽诱导表达的影响
4.4试验结果和分析
4.4.1重组阳离子抗菌肽发酵上清液的体外抑菌活性检验结果及分析
4.4.2诱导表达产物发酵上清液抑菌能力和氨苄青霉素(Amp)的比较结果分析
4.4.3基因工程菌最适生长培养基
4.4.4基因工程菌株生长的最适初始pH
4.4.5基因工程菌株生长曲线
4.4.6诱导时间对阳离子抗菌肽诱导表达的影响
本章小结
结论
参考文献
附录一培养基
附录二缓冲液
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
