动物性食品中β-内酰胺类药物及其代谢物检测方法的研究

摘要

β-内酰胺类抗生素是指含有β-内酰胺环的抗生素，因为抗菌作用强，是目前在牲畜疾病医药治疗和预防中应用最多的一类抗生素，如果使用不当，容易残留在动物源性食品中。长期食用残留β-内酰胺类抗生素的食品，就如同长期摄入低剂量的抗生素，使对抗生素过敏的人产生过敏反应，此外，容易使人体产生耐药菌株，给患者使用此类抗生素治疗疾病带来不良影响。目前，各类法规文件规定检测β-内酰胺类抗生素残留时，只检测母体化合物，甚少涉及代谢物的残留；而有些高含量的代谢物也会使对抗生素过敏的人产生过敏反应。因此，为了保证人们饮食的安全和卫生，不仅要检测动物源性食品中的抗生素原药，还需要检测其代谢产物。
　　 本论文通过对动物源性食品进行样品前处理优化，建立了超高效液相色谱-串联四极杆质谱联用检测动物源性食品中残留的β-内酰胺类抗生素及其代谢物的方法，并进行了方法学考察。该方法具有快速、灵敏、选择性高的特点。本论文所作的工作及结论如下：
　　 1.建立了超高效液相色谱-串联四极杆质谱联用检测牛奶中羟氨苄青霉素、青霉素G、苯唑青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素、头孢唑啉、头孢噻肟、头孢氨苄、头孢噻呋九种β-内酰胺类抗生素残留的方法。以WatersAcquityUPLCBEHShieldRP18色谱柱分离，乙腈和0.02％甲酸水溶液作为流动相，在优化的色谱条件下，所有物质在六分钟内达到完全分离。青霉素V作为内标，各物质的线性相关系数R均大于0.9980，在0.5MRL、1MRL、2MRL三个浓度的添加回收实验中，回收率为91％～104％，RSD≤10％，S/N＞3的LODs为0.04～0.2ng·mL-1，LOQs分别设定为MRLs的一半，且结果显示S/N均大于10。应用此方法检测了北京当地超市购买的20份牛奶样品，结果表明样品中没有发现超标的β-内酰胺类抗生素残留。
　　 2.建立了超高效液相色谱-串联四极杆质谱联用检测牛奶中羟氨苄青霉素、青霉素G及其五种主要代谢产物残留。使用WatersAcquity UPLCHSST3为分析柱，乙腈和添加5mmol·L-1乙酸铵、0.15％甲酸的水溶液作为流动相，在优化的色谱条件下，七种目标物质在六分钟内达到完全分离，且峰形窄，对称性强。以PENV作为内标，牛奶的线性相关系数R均大于0.9985，LODs为0.02～1.0ng·mL-1，LOQs为2.5～5.0ng·mL-1，在LOQ、2LOQ、4LOQ三个浓度的添加水平下，回收率为85％～108％，RSD小于13％。应用该方法检测北京当地超市的40份牛奶样品，在部分牛奶中检出了较高浓度的青霉素G的代谢产物，为国家有关部门完善相关的代谢物检测方法提供参考依据。
　　 3.建立了超高效液相色谱-串联四极杆质谱联用检测牛肉中羟氨苄青霉素、青霉素G及其五种主要代谢产物残留，使用WatersAcquityUPLCHSST3为分析柱，乙腈和添加5mmol·L-1乙酸铵、0.15％甲酸的水溶液作为流动相，在优化的色谱条件下，七种目标物质在六分钟内达到完全分离，且峰形窄，对称性强。以PENV作为内标，线性相关系数R均大于0.9952，LODs为0.05～3.0μg·kg-1，LOQs均为25μg·kg-1，在LOQ、2LOQ、4LOQ三个浓度的添加水平下，回收率为91％～106％，RSD小于9％。该方法成功应用于农业部“无公害食品行动计划”抽查的20份牛肉样品，牛肉中没有发现原药和代谢产物。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1兽药残留概况

1.2 β-内酰胺类抗生素简介

1.2.1抗生素简介

1.2.2 β-内酰胺类抗生素

1.3 β-内酰胺类抗生素残留分析的样品前处理

1.3.1固相萃取技术

1.3.2基质固相分散技术

1.3.3分子印迹技术

1.3.4膜分离技术

1.3.5免疫亲和色谱法

1.4 β-内酰胺类抗生素分析检测方法及应用

1.4.1薄层色谱法

1.4.2毛细管电泳法

1.4.3高效液相色谱法

1.4.4液相色谱-质谱联用法

1.4.5气相色谱法

1.4.6免疫分析法

1.5本论文研究的意义和主要任务

第二章超高效液相色谱-串联四极杆质谱联用分析牛奶中β-内酰胺类药物残留

2.1前言

2.2实验部分

2.2.1试剂与样品

2.2.2设备及仪器

2.2.3标准储备液、校正曲线及流动相的配制

2.2.4质谱条件

2.2.5色谱条件

2.2.6牛奶样品前处理

2.3结果与讨论

2.3.1质谱条件的优化

2.3.2液相条件的优化

2.3.3样品前处理方法的优化

2.3.4方法学考察

2.4实际样品的检测

2.5小结

3.1前言

3.2实验部分

3.2.1试剂与样品

3.2.2设备及仪器

3.2.3标准储备液、校正曲线及流动相的配制

3.2.4质谱条件

3.2.5色谱条件

3.2.6样品前处理

3.3结果与讨论

3.3.1质谱条件的优化

3.3.2液相条件的优化

3.3.3样品前处理方法的优化

3.3.4方法学考察

3.4实际样品的检测

3.5小结

第四章结论与展望

4.1结论

4.2论文的创新点

4.3展望

参考文献

致谢

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