Micro RNA-198和Micro RNA-107对食管癌细胞自噬的调控机制研究

摘要

细胞自噬是真核细胞独有的一种生命现象，通过溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质，从而实现胞内废弃物质的循环利用，恢复细胞稳态。例如在氧气缺乏或营养不足的情况下，细胞会提高自噬水平以恢复能量供应，维持胞内稳态。然而当自噬过度的时候，细胞就会发生自噬性的死亡。
　　关于自噬与肿瘤发生发展的关系仍未完全阐明，在肿瘤治疗过程中发现许多因素都可以引起细胞自噬。当对肿瘤进行放射线照射时，可促进肿瘤细胞发生自噬性死亡。一些药物可以诱导肿瘤细胞发生自噬从而来达到治疗肿瘤的目的，白藜芦醇可以诱导卵巢癌细胞自噬从而对癌症的治疗起到辅助作用。科学家们已经越来越重视细胞自噬对于癌症治疗的重要作用。
　　Micro RNA是真核细胞中存在的一种长度约为22bp的非编码RNA，其通过与mRNA的互补配对来沉默靶基因从而起到对基因的调控作用。本文利用细胞转染技术将micro RNA198和microRNA107导入食管癌细胞之中，从细胞层面和蛋白层面研究癌细胞的自噬水平变化以及自噬对细胞生存的影响，并通过生物信息学和基因芯片联用的手段找到了micro RNA的靶基因，并对此进行了全面的验证，从而完整的阐明了miR-198和miR-107调控食管癌细胞自噬和生长的机制。
　　本研究首次发现，在食管癌细胞中，miR-198和miR-107通过调控一个共同的靶基因SRGAP1，从而提高细胞的自噬程度。除此之外，我们还做了两种microRNA对癌细胞生长、侵袭和迁移能力影响的实验，结果表明两种miRNA都是抑癌因子，而有文献报道SRGAP1为癌基因，这与我们的实验结果是一致的。综上所述，这些结果表明miR-198和miR-107可以作为肿瘤生物治疗的潜在靶点。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 自噬简介

1．1．1 自噬的发生过程

1．1．2 自噬的检测方法

1．2 Micro RNA简介

1．3 自噬与癌症的关系

1．4 立项背景和课题意义

1．5 主要研究内容

第二章 实验方法与操作

2．1 细胞培养相关方法

2．1．3 细胞培养方法

2．2 Wesrern Blot实验方法

2．2．1 实验试剂及抗体

2．2．2 蛋白提取和BCA定量

2．2．3 Western步骤

2．3 细胞及分子生物学实验方法

2．3．1 提取细胞总RNA

2．3．2 逆转录

2．3．4 RT-qPCR

2．3．5 细胞计数实验

2．3．6 细胞克隆形成实验

2．3．7 细胞划痕实验

2．3．8 细胞Transwell实验

2．3．9 细胞式实验

2．4 激光共聚焦显微镜使用方法

第三章 实验结果与分析

3．2 验证micro RNA对细胞自噬的影响

3．2．1 蛋白质水平验证

3．2．2 细胞水平验证

3．3 micro RNA通过自噬对肿瘤细胞功能的影响

3．3．1 细胞计数结果

3．3．2 克隆形成实验结果

3．3．3 细胞划痕实验结果

3．3．4 TRANSWELL实验结果

3．3．5 细胞周期实验结果

3．3．6 细胞凋亡实验结果

3．4 预测micro RNA靶基因

3．5 靶基因的验证

3．5．1 qPCR验证

3．5．2 Wrstern blot验证

3．6 micro RNA通过靶基因影响细胞自噬

3．7 实验注意事项

3．7．1 细胞培养注意事项

3．7．2 涉及RNA操作注意事项

3．7．3 Western blot实验操作注意事项

第四章 结论与展望

4．1 本论文的结论

4．2 本论文的创新点

4．3 展望

参考文献

致谢

研究成果及发表的论文

导师及作者简介