microRNA-191-5 p靶向PLCD1调控食管癌细胞顺铂耐药机制研究

摘要

目的:探究微小RNA(miR)-191-5p通过靶向磷脂酶CD1(PLCD1)调控食管癌细胞顺铂(DDP)耐药的机制.方法:分别转染miR-191-5 p模拟物和阴性对照于DDP耐药的食管癌细胞株ECA109/DDP细胞中,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ECA109/DDP细胞转染后miR-191-5p的表达情况,比较ECA109/DDP与亲本细胞ECA109间miR-191-5 p的表达差异.DDP处理转染后的ECA109/DDP细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测转染后ECA109/DDP细胞对DDP的敏感度.蛋白质印迹法检测PLCD1蛋白的表达情况.用双荧光素酶靶标实验验证miR-191-5 p与PLCD1之间的作用关系.结果:ECA109/DDP中miR-191-5 p的表达量明显低于亲本细胞ECA109,转染miR-191-5 p模拟物的ECA109/DDP细胞与转染阴性对照的细胞相比miR-191-5 p的表达水平明显升高.DDP联合处理后,miR-191-5 p模拟物的转染使ECA109/DDP细胞的增殖活性降低.蛋白质印迹实验证明miR-191-5 p模拟物转染组较阴性对照组PLCD1蛋白表达明显下降(P<0.05).双荧光素酶靶标实验证明PLCD1是miR-191-5 p的直接作用靶点.结论:miR-191-5 p可能通过靶向PLCD1来抑制细胞的增殖,继而逆转ECA109/DDP细胞对DDP的耐药性.