多基因组合表达和敲除代谢调控提高产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)2,3-丁二醇产量研究

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缩略语说明

第1章 绪 论

1.1 2,3-丁二醇概况

1.1.1 2,3丁二醇的性质

1.1.2 2,3-丁二醇的应用价值

1.2 2,3-丁二醇的生产方式

1.3 微生物发酵法产2,3-丁二醇研究

1.3.1 产2,3-丁二醇的菌株

1.3.2 2,3-丁二醇的代谢途径

1.3.3 影响2,3-丁二醇产量的关键酶

1.3.4 合成途径中的中间产物及副产物

1.4 本文的立题依据及研究内容

1.4.1 立题依据

1.4.2 研究内容

1.4.3 技术路线

第2章 多基因表达对产气肠杆菌产2,3-丁二醇的影响

2.1 实验材料

2.1.1 菌株和质粒

2.1.2 引物

2.1.3 酶制剂与试剂盒

2.1.4 培养基和试剂

2.2 实验方法

2.2.1 表达载体pET-budB、pET-budC和pET-budB/budC的构建

2.2.2 过表达菌株构建

2.2.3 SDS-PAGE电泳

2.2.4 过表达菌株的生长特性

2.2.5 过表达菌株中产2,3-丁二醇相关基因的表达分析

2.2.6 过表达菌株胞内NADH/NAD+测定

2.2.7 不同碳源底物的利用实验

2.3 实验结果

2.3.1 过表达菌株的构建与验证

2.3.2 过表达菌株的生长曲线和pH变化

2.3.3 2,3-丁二醇代谢途径关键基因表达情况分析

2.3.4 基因过表达对菌株胞内NADH/NAD+的影响

2.3.5 不同碳源底物对2,3-丁二醇产量的影响

2.4 本章小结

第3章 基因组合敲除对产气肠杆菌产2,3-丁二醇的影响

3.1 实验材料

3.1.1 菌株和质粒

3.1.2 引物

3.1.3 培养基和试剂

3.2 实验方法

3.2.1 丙酮酸甲酸裂解酶基因敲除

3.2.2 乳酸脱氢酶基因敲除

3.2.3 菌株的生长特性

3.2.4 qRT-PCR分析基因缺失菌株的基因表达情况

3.2.5 菌株NADH/NAD+测定

3.2.6 不同碳源底物的利用实验

3.3 实验结果

3.3.1 pfl敲除菌株E. aerogenesΔpfl的构建

3.3.2 ldh敲除菌株E. aerogenesΔldh的构建

3.3.3 基因缺失株的生长曲线和pH变化

3.3.4 基因缺失株中产2,3-丁二醇相关基因的qRT-PCR表达分析

3.3.5 基因缺失对菌株胞内NADH/NAD+影响

3.3.6 不同碳源底物对代谢2,3-丁二醇产量的影响

3.4 本章小结

第4章 扩大培养产2,3-丁二醇分析

4.1 实验材料

4.1.1 菌株

4.1.2 培养基和试剂

4.2 实验方法

4.2.1 菌株扩大培养

4.2.2 菌株的生长特性

4.2.3 菌株代谢流分析

4.3 实验结果

4.3.1 E.a-3扩大培养结果分析

4.3.2 E.a-6扩大培养结果分析

4.3.3 E.a-3和E.a-6代谢终产物比较

4.4 小结

第5章 总结与展望

5.1 总结

5.2 展望

参考文献

致谢

作者简历