当归四逆汤对硬皮病小鼠循环血中AECA、vWF、TXB2、6-keto-PGF1α含量的影响

摘要

目的：本研究旨在通过观察不同剂量当归四逆汤对硬皮病小鼠血清中抗内皮细胞抗体（ anti-endothelial cell antibody, AECA），血浆中血管性血友病因子（ von Willebrand factor, vWF）、血栓素 B2（ thromboxane B2, TXB2）、6-酮前列腺素 F1α（6-keto-ProstaglandinF1α,6-keto-PGF1α）含量的影响，以及肺与皮肤的病理学改变，评价当归四逆汤对硬皮病小鼠的疗效及量效关系，探讨当归四逆汤对系统性硬化症（ systemic sclerosis， SSc）可能的作用机制，为临床治疗 SSc提供依据。　　方法：　　1、实验分组：将90只 BALB/c雌性小鼠随机分为空白组、模型组、薄芝片组、当归四逆汤高剂量组、当归四逆汤中剂量组和当归四逆汤低剂量组。适应性饲养6天，实验前3天对小鼠背部皮肤做脱毛处理。　　2、建造动物模型：对空白组小鼠脱毛区域皮下注射磷酸盐缓冲液（ Phosphate Buffered Saline, PBS）0.1ml，其余各组小鼠注射0.1ml浓度为200ug/ml的博来霉素（ Bleomycin, BLM）溶液，每日1次，连续给药21天。　　3、药物干预：造模成功后，当归四逆汤高、中、低剂量组分别用高、中、低不同浓度的当归四逆汤水煎剂灌胃给药，薄芝片组用薄芝片溶液灌胃给药，模型组、空白组用生理盐水灌胃给药，每日1次，连续给药21天。　　4、采集标本及检测：采用摘眼球取血方法取血，分离血清血浆，采用酶联免疫吸附法（ enzym elinked immunosorbent assay, ELISA）分别检测血浆中 TXB2、6-keto-PGF1α、vWF和血清中 AECA的含量。切取小鼠肺部和病变区皮肤组织，以10％的甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片， HE染色，显微镜下观察肺与皮肤的病理学变化。　　结果：　　1、用 BLM诱导的硬皮病 BALB/c雌性小鼠模型造模成功。　　2、皮肤和肺的病理学改变：模型组小鼠背部注射区皮肤粗糙、硬度增强，真皮层增厚，胶原纤维增粗、变密，棘细胞层增生，真皮下层血管减少并伴有炎症细胞浸润，当归四逆汤各组的病理改变较轻；模型组小鼠肺脏血管壁增厚，肺泡壁增厚，胶原纤维增多，间质细胞增生并伴有淋巴细胞浸润，当归四逆汤各组的病理改变较轻。　　3、各组血浆或血清中 vWF、AECA、TXB2、6-keto-PGF1α含量变化：　　（1）模型组小鼠血清中 AECA浓度明显高于空白组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；薄芝片组浓度低于模型组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；当归四逆汤高、中、低剂量组均低于模型组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；当归四逆汤各组均高于薄芝片组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；随着当归四逆汤药物浓度的增高， AECA浓度递减。　　（2）模型组小鼠血清中 vWF浓度明显高于空白组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；薄芝片组浓度低于模型组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；当归四逆汤高、中、低剂量组均低于模型组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；当归四逆汤各组均高于薄芝片组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；随着当归四逆汤药物浓度的增高， vWF浓度递减。　　（3）模型组小鼠血清中 TXB2浓度明显高于空白组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；薄芝片组浓度低于模型组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；当归四逆汤高、中、低剂量组均低于模型组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；当归四逆汤中低剂量组均高于薄芝片组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；当归四逆汤高剂量组高于薄芝片组，但无统计学意义（ P>0.05）；随着当归四逆汤药物浓度的增高，TXB2浓度递减。　　（4）模型组小鼠血清中6-keto-PGF1α浓度明显低于空白组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；薄芝片组浓度高于模型组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；当归四逆汤高、中、低剂量组均高于模型组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；当归四逆汤各组均低于薄芝片组，差异具有统计学意义（ P<0.01）；随着当归四逆汤药物浓度的增高，6-keto-PGF1α浓度递增。　　结论：　　1、 TXB2、vWF、AECA浓度升高和6-keto-PGF1α浓度降低参与了 BLM诱导的 SSc小鼠的发病，并可以作为检测病情和评价治疗效果的指标。　　2、当归四逆汤对B L M诱导的 SSc小鼠有较好疗效，其作用随着药物浓度的升高而逐步加强，存在明显的量效关系。　　3、当归四逆汤治疗 BLM诱导的 SSc小鼠的作用机制可能是通过降低小鼠血中 TXB2、vWF、AECA浓度，升高6-keto-PGF1α浓度实现的。　　4、当归四逆汤对 SSc的治疗作用可能是通过调整营卫系统功能来实现的。

目录

声明

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 皮肤和肺的病理学改变

2 各组小鼠血清中 AECA 浓度的变化

3 各组小鼠血浆中 vWF 浓度的变化

4 各组小鼠血浆中 TXB2与 6-keto-PGF1α浓度的变化

讨论

1 SSc 与痹病的关系

2 营卫与痹病的关系

3 营卫与 SSc 的关系

4 当归四逆汤的源流及临床应用

5 当归四逆汤治疗 SSc 的作用机理探讨

6 vWF、AECA、TXB2、6-keto-PGF1α与 SSc 的关系

7 硬皮病动物模型的评价

8 结果探讨

结论

致谢

参考文献

附录

附录 1 病理图片

附录 2 文献综述系统性硬化症的中医研究进展

附录 3 在校期间论文论著和科研情况