论文说明
声明
摘要
符号和缩略语说明
第一章文献综述
第一节灵芝及其次生代谢产物研究现状
1．灵芝的药用价值
2．影响灵芝次生代谢产物合成的因素
第二节热胁迫的研究现状及进展
1热胁迫对生长发育的影响
2热胁迫对次生代谢的影响
3热胁迫对信号调控网络的影响
第三节NO信号研究进展
1热胁迫中NO的研究进展
2NO与其它信号的相关性
3NO对于基因表达和蛋白活性的调控
第四节研究目的和意义
第二章NO参与调控热胁迫诱导灵芝酸的生物合成
前言
第一节NO抑制热胁迫中灵芝酸的生物合成
1实验材料
2实验方法
3实验结果
4讨论
1实验材料
2实验方法
3实验结果
4讨论
第三章NO通过抑制顺乌头酸酶活性参与调控热胁迫诱导GA的生物合成
前言
1实验材料
1．1菌株
1．2菌株培养方法
1．3处理试剂
1．4实验仪器
2实验方法
2．1热胁迫处理方法
2．2绒毛状菌丝制备
2．3线粒体ROS的检测
2．4检测灵芝线粒体中NAD+／NADH比率及NADH含量
2．5检测NO对TCA循环中三个关键酶活性影响
2．6检测顺乌头酸酶活性
2．7检测柠檬酸含量
2．8构建Acon沉默转化子
2．9灵芝酸的检测方法
3实验结果
3．1外源NO处理能够抑制热胁迫诱导ROS的产生
3．2检测热胁迫对NR沉默转化子中线粒体ROS含量的影响
3．3检测NO对热胁迫中NADH／NAD+比率的影响
3．4检测NO对热胁迫中TCA循环关键酶活性的影响
3．5检测NO对热胁迫中顺乌头酸酶活性的影响
3．6构建及筛选顺乌头酸酶沉默转化子
3．7检测热胁迫下顺乌头酸酶沉默转化子中线粒体ROS含量
3．8检测热胁迫下顺乌头酸酶沉默转化子中线粒体NADH／NAD+比率
3．9检测热胁迫下顺乌头酸酶沉默转化子中灵芝酸的含量
4讨论
第四章NO通过S-亚硝基化修饰抑制顺乌头酸酶活性
前言
1实验材料
1．1菌株
1．2菌株培养方法
1．3处理试剂
1．4实验仪器
2实验方法
2．1线粒体顺乌头酸酶原核表达和纯化
2．2体外蛋白质生物素转化检测方法(Biotin-Switch method)
2．3S-亚硝基化蛋白的质谱鉴定
2．4构建点突变载体
2．5检测顺乌头酸酶酶活
3实验结果
3．1原核表达线粒体顺乌头酸酶
3．2检测NO对于Acon蛋白S-亚硝基化修饰作用
3．3预测Acon蛋白中可能存在的S-亚硝基化位点
3．4预测灵芝Acon蛋白三维结构
3．5质谱检测Acon发生S-亚硝基化修饰位点
3．6表达纯化Acon C594S点突变蛋白
3．7检测NO对Acon C594S蛋白S-亚硝基化修饰作用
3．8检测NO对Acon和Acon C594S蛋白酶活的影响
4讨论
全文总结
创新点
文章发表情况
参考文献
附录
致谢
南京农业大学;
