声明
摘要
符号和缩略语说明
第一章文献综述
第一节热胁迫诱导灵芝酸生物合成
2热胁迫诱导灵芝三萜合成提高
第二节细胞膜甘油磷脂和膜流动性
1甘油磷脂及其基础功能特征
2细胞膜流动性
3脂肪酸和脂肪酸脱氢酶
第三节磷脂信号
1 磷脂在动物、植物和微生物中研究进展概述
2磷脂酶D和磷脂酸
3肌醇磷脂与钙信号
第四节研究目的和意义
第二章热胁迫诱导的GA生物合成依赖膜流动性升高
引言
1实验材料
1．1菌株、质粒、试剂
1．2菌株培养
2实验方法
2．1热胁迫处理和化学试剂处理
2．2基因组DNA提取
2．3总RNA的提取
2．4总RNA中DNA的消化
2．5灵芝cDNA的制备(30μL体系)
2．6灵芝电击转化及沉默转化子的筛选
2．7构建过表达质粒和过表达菌株
2．8 qRT-PCR分析基因表达水平，验证转化子
2．9脂肪酸提取与测定
2．10膜流动性测定
2．11 GA及其中间代谢产物含量测定
2．12数据分析
3结果分析
3．1热胁迫导致灵芝WT菌株膜流动性增加
3．2外源BA和DMSO对灵芝WT菌株膜流动性和GA含量的影响
3．3外源DMSO抑制热胁迫诱导的膜流动性和GA含量升高
3．4克隆灵芝两个D9des基因
3．5构建灵芝D9des基因的沉默和过表达转化子
3．6沉默D9des对脂肪酸组成、不饱和度及膜流动性的影响
3．7过表达D9des对脂肪酸组成、不饱和度及膜流动性的影响
3．8沉默D9des基因对GA生物合成的影响
3．9过表达D9des基因对GA生物合成的影响
3．10在热胁迫下，膜流动性参与GA生物合成
4讨论
第三章PLD和PA介导热胁迫诱导的GA生物合成
引言
1 实验材料
1．1菌株、质粒和培养条件
1．2主要试剂
2实验方法
2．1热胁迫处理和化学试剂处理
2．2磷脂提取与质谱鉴定
2．3 PLD酶活测定
2．4构建RNAi质粒和菌株
3．1 热胁迫对灵芝的六类磷脂成分的改变
3．2热胁迫对灵芝细胞膜六类磷脂的亚类成分的改变
3．3热胁迫对PLD酶活的影响
3．4克隆pld基因并构建沉默转化子
3．5热胁迫处理对pld基因沉默菌株PA和PE含量的影响
3．6外源正丁醇抑制了热胁迫诱导的GA生物合成
3．7外源PA诱导GA生物合成
3．8沉默pld基因抑制了热胁迫诱导的GA生物合成
4讨论
第四章热胁迫激活的胞内钙信号依赖PI(4，5)P2形成
引言
1 实验材料
1．1菌株、质粒和培养条件
1．2主要试剂
2实验方法
2．1 热胁迫处理和化学试剂处理
2．3测定PI4K酶活
2．4测定PIP5K酶活
2．5构建RNAi质粒和菌株
2．9数据分析
3结果分析
3．1 热胁迫对PI4K和PIP5K酶活以及PI4P和PI(4，5)P2含量的影响
3．2 Li+处理抑制了热胁迫诱导的钙离子升高
3．3预处理wortmannin部分抑制了热胁迫诱导的钙离子浓度升高
3．4构建灵芝pi4k基因沉默转换子
3．5沉默pi4k部分抑制了热胁迫诱导的胞内钙离子浓度升高
3．6热胁迫下外源添加PI4P去除了Li+对胞内钙离子浓度的抑制
3．7构建pip5k沉默转化子
3．8沉默pip5k部分抑制了热胁迫诱导的胞内钙离子浓度升高
3．9外源添加LiCl和wortmanin抑制了热胁迫诱导的GA生物合成
3．10沉默pi4k和pip5k基因部分抑制了热胁迫诱导的GA生物合成
4讨论
参考文献
全文总结
创新点
研究展望
文章发表情况
附录
致谢
南京农业大学;
