灵芝酸C2调控S6K/SREBPs信号通路对肝细胞脂代谢的影响及机制研究Δ

摘要

目的:研究灵芝酸C2(GAC2)的体外降脂作用,并基于核糖体S6蛋白激酶(S6K)/固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)信号通路探讨其可能机制.方法:以人肝细胞HL-7702为对象,采用MTT法考察低、中、高剂量(5、10、20μmol/L,下同)GAC2作用后细胞的相对活力;以洛伐他汀为阳性对照,采用酶联免疫吸附测定法检测低、中、高剂量GAC2作用后细胞中胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的含量,并采用尼罗红染色法观察细胞内的脂质堆积情况;转染SREBPs报告基因质粒后,以25-羟基胆固醇(25-HC)为阳性对照,采用荧光素酶报告基因法检测低、中、高剂量GAC2作用后细胞中SREBPs荧光素酶的相对活性;以25-HC为阳性对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测中、高剂量GAC2作用后细胞中SREBPs及其下游基因mRNA的表达情况;以SREBPs抑制剂(25-HC)、S6K抑制剂(雷帕霉素)为参照,采用Western blotting法检测细胞中SREBP-1、SREBP-2的表达情况[以成熟SREBPs(n-SREBPs)表示]以及磷酸化S6K与S6K的相对表达量比值(p-S6K/S6K比值);利用AutoDock 4.0等软件对S6K与GAC2进行分子对接.结果:低、中、高剂量GAC2对细胞相对活力无显著影响(P>0.05).与空白对照组比较,洛伐他汀组和GAC2高剂量组细胞中TC含量以及洛伐他汀组和GAC2中、高剂量组细胞中TG含量均显著降低(P<0.05或P<0.01),各给药组细胞中的脂滴均有所减少.与空白对照组比较,25-HC组和GAC2低、中、高剂量组细胞中的SREBPs荧光素酶相对活性均显著降低;25-HC组和GAC2中、高剂量组细胞中HMGCS1、MVK、SCD、HMGCR基因mRNA,25-HC组细胞中DHCR7基因mRNA,GAC2高剂量组细胞中SREBP-2基因mRNA,25-HC组和GAC2高剂量组细胞中DHCR24、MSMO2基因mRNA的相对表达量均显著降低;25-HC组和GAC2低、中、高剂量组细胞中SREBP-1蛋白的相对表达量,25-HC组和GAC2高剂量组n-SREBP-2蛋白的相对表达量以及霉帕霉素组和GAC2各剂量组p-S6K/S6K比值均显著降低(P<0.05或P<0.01).分子对接结果显示,GAC2可通过氢键与S6K的氨基酸残基Arg335、Arg330、Ala332结合.结论:GAC2可降低HL-7702细胞的脂质水平,其调控作用可能与抑制S6K/SREBPs信号通路的表达有关.