酿酒酵母必需基因遗传抑制子筛选体系的建立及验证

目录

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摘要

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1．1．1必需基因定义及重要性

1．1．2酿酒酵母及其必需基因简介

1．1．3酿酒酵母在生物工程应用研究中的作用

1．2遗传抑制子筛选研究

1．2．1遗传相互作用及抑制子定义

1．2．2遗传抑制作用机理

1．2．3酿酒酵母条件突变体及遗传抑制子筛选简介

1．3遗传抑制子在化疗药物靶点筛选中的应用

1．3．1必需基因突变与疾病发生

1．3．2化疗药物耐药机制研究

1．3．3必需基因遗传抑制子与化疗药物靶点

1．4本研究目的及意义

2．1．1菌株和质粒

2．1．2主要试剂

2．1．3主要仪器

2．1．4培养基及常用溶液及配制

2．2试验方法

2．2．1酵母基因组DNA提取

2．2．2琼脂糖凝胶电泳

2．2．3载体构建

2．2．4酿酒酵母转化

2．2．5酵母细胞全蛋白提取

2．2．6蛋白免疫印迹技术

2．2．7酿酒酵母菌株构建

2．2．8梯度稀释表型分析

2．2．9酿酒酵母基因组抑制子筛选

2．2．10酿酒酵母剂量抑制子筛选

2．2．11酿酒酵母喜树碱耐受基因筛选

2．2．12分子进化树构建

2．2．13蛋白结构域预测

2．2．14蛋白三级结构预测

3结果与分析

3．1酿酒酵母必需基因遗传抑制子筛选体系建立策略

3．2遗传筛选条件突变菌株特性分析

3．2．2 gpn2ts温度敏感菌株特性分析

3．3酿酒酵母必需基因RBA50与GPN2遗传抑制子的筛选

3．3．1 ygk3 G115R是突变基因rba50基因组抑制子

3．3．2剂量抑制子回复gpn2ts生长缺陷

3．4酿酒酵母必需基因遗传抑制子筛选体系应用性的验证

3．4．2 mec1Δ耐药菌株的成功筛选

3．4．3 top1 R576G是CPT耐受基因

4讨论

4．1遗传抑制子筛选效率及假阳性排除

4．2 rba50ts与gpn2ts遗传抑制子

4．3酿酒酵母必需基因遗传抑制子筛选体系优化

5结论

参考文献

附录

在读期间发表的论文及专利

作者简历

致谢