声明
前言
第一章 绪论
1.1 大肠杆菌异源蛋白分泌系统
1.1.1 大肠杆菌异源蛋白分泌途径
1.1.2 Ⅰ 型分泌系统
1.1.3 Ⅱ 型分泌系统
1.1.4 大肠杆菌异源蛋白分泌表达策略
1.2 绿色荧光蛋白研究概况
1.2.1 绿色荧光蛋白
1.2.2 超折叠绿色荧光蛋白
1.2.3 可溶性绿色荧光蛋白
1.3 Red重组系统
1.4热休克启动子
第二章 热休克启动子功能效率验证与载体改造
2.1 前言
2.2 实验材料
2.2.1菌株与质粒
2.2.2 引物
2.2.3 试剂
2.2.4 工具酶与试剂盒
2.2.5 培养基与溶液的配制
2.2.6 主要仪器设备
2.3 实验方法
2.3.1 CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞
2.3.2 热激法转化大肠杆菌
2.3.3 质粒DNA提取
2.3.4 寡聚核苷酸链退火反应
2.3.5 酶切反应
2.3.6 载体与目的片段的纯化
2.3.7 连接反应
2.3.8菌落PCR鉴定重组子
2.3.9 pHS-sGFP 表达载体构建
2.4 实验结果
2.4.1 构建pHS-sGFP重组质粒
2.4.2 热休克启动子功能验证
2.4.3 构建pKD-Phs重组辅助质粒
2.5 本章小结
第三章 大肠杆菌lpp 基因的敲除及替换
3.1前言
3.2实验材料
3.2.1 菌株与质粒
3.2.2 引物
3.2.4 工具酶与试剂盒
3.2.5 培养基与溶液的配制
3.2.6 主要仪器设备
3.3实验方法
3.3.2 电击法转化大肠杆菌
3.3.3 重组PCR构建基因敲除表达盒
3.3.5 Red 重组系统构建lpp 缺失突变株
3.3.6 突变菌株的筛选与鉴定
3.4实验结果
3.4.1 构建lpp基因敲除表达盒
3.4.2构建lpp缺失突变株
3.4.3 突变菌株形态观察
3.5本章小结
第四章 突变菌株sGFP 分泌水平分析
4.1 前言
4.2实验材料
4.3实验方法
4.3.1 绘制菌株生长曲线
4.3.2 确定不同大肠杆菌菌株最佳诱导时间
4.3.3 sGFP 分泌水平分析
4.4实验结果
4.4.1 突变菌株生长曲线
4.4.2 确定最佳诱导时间
4.4.3 sGFP分泌水平分析
4.5本章小结
第五章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
附 录
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
聊城大学;
