右美托咪定预处理对大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤的影响及其机制研究

摘要

本文分为以下两个部分进探讨：　　第一部分 大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤模型的建立情况　　目的:学习大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤模型的建立方法,为研究肝移植术后胆道缺血再灌注损伤奠定模型基础.方法:SPF级、雄性SD大鼠50只,学习过程分为两个阶段:第一阶段20只,第二阶段30只.分析手术成功率,24h大鼠存活率及建模失败原因.　　结果:第一阶段手术成功率70%,24h存活率60%;第二阶段手术成功率93.3%,24h存活率90%.其中建模失败的主要原因有出血、血管缝合失败、麻醉意外、气胸.　　结论:建立大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤模型,需要熟练的显微操作技术,减少各种并发症的发生、提高手术成功率,才能获得稳定的动物模型.　　第二部分 右美托咪定预处理对大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤的影响及其机制　　目的:探讨右美托咪定预处理对大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤的影响及其可能的机制,为肝移植术后胆道并发症的治疗提供新思路.　　方法:SPF级、雄性SD大鼠128只,随机分成4组,假手术组(Sham)、假手术+右美托咪定预处理组(Sham+Dex)、胆道缺血再灌注组(IRI)和缺血再灌注+右美托咪定预处理组(IRI+Dex),每组32只.Sham+Dex组和IRI+Dex组于术前30min经腹腔注射右美托咪定100ug/Kg(右美托咪定浓度10ug/ml),Sham组和IRI组注射等量的生理盐水.手术方式:Sham和Sham+Dex组开腹后离断肝周韧带,游离肝门,结扎左膈下静脉及右肾上腺静脉;IRI组和IRI+Dex组行自体肝移植胆道缺血再灌注操作,均经历15min冷灌注时间,25min无肝期,胆道缺血时间为1h.再灌注后3、6、12、24h各时间点每组处死8只大鼠.生化法测定各时间点血清谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)和直接胆红素(DBIL)浓度.取24h点肝内外胆管进行组织病理学检查并对胆道损伤程度进行评分.取24h点胆总管组织测定超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平.酶联免疫法测定24h点血液标本炎症因子:TNF-α及IL-10水平.Tunel法测定24h点胆管细胞凋亡情况.Western blot法检测各组24h点肝外胆管组织GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP和cleaved-Caspase3蛋白表达量.　　结果:1.与Sham组和Sham+Dex组相比,IRI组血清ALT、ALP、DBIL及病理评分明显增加;IRI+Dex组较IRI组血清ALT、ALP、DBIL及病理评分明显减低,差异有统计学意义(P<0.05).2.IRI组TNF-α水平明显高于Sham组和Sham+Dex组,IL-10水平明显低于Sham组和Sham+Dex组;IRI+Dex组较IRI组TNF-α水平下降,IL-10水平升高,差异有统计学意义(P<0.05).3.IRI组MDA水平明显高于Sham组和Sham+Dex组,SOD水平明显低于Sham组和Sham+Dex组;IRI+Dex组较IRI组SOD水平升高,MDA水平下降,差异有统计学意义(P<0.05).4.IRI组凋亡指数明显高于Sham组和Sham+Dex组;IRI+Dex组较IRI组凋亡指数降低,差异有统计学意义(P<0.05).5.IRI组GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP以及cleaved-Caspase3表达量明显高于Sham组和Sham+Dex组;IRI+Dex组较IRI组GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP以及cleaved-Caspase3表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05).　　结论:1.右美托咪定能通过减轻炎症反应、氧化应激水平及胆管细胞凋亡实现对移植肝胆道缺血再灌注损伤的保护作用.2.右美托咪定可能通过PERK-eIF2α-CHOP凋亡信号通路实现对胆道缺血再灌注损伤的保护作用.

目录

前言

第一部分 大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤模型的建立

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 观察指标

4 统计学方法

结果

1手术成功率及24h存活率

2 建模失败的主要原因

讨论

结论

第二部分 右美托咪定预处理对大鼠自体肝移植胆道缺血再灌注损伤的影响及其机制

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计方法

结果

1 血清ALT、ALP、DBIL水平变化

2 肝内外胆管组织病理变化及胆道损伤评分

3 血清TNF-α、IL-10水平变化

4 胆管组织MDA和SOD水平变化

5 胆管细胞凋亡水平

6 内质网应激凋亡通路相关蛋白的表达

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

综述:肝移植术后缺血型胆道病变病因的研究进展