rHuEPO预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

摘要

肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury, HIRI)是常见的临床病理生理过程，是肝切除术、肝移植、肝外伤、失血性和心源性休克等疾病共同经历的一个多因素参与的过程。HIRI是术后肝功能异常、原发性肝移植无功能、肝功能衰竭的重要原因。研究表明，HIRI是影响肝移植术后移植物长期存活的危险因素。如何干预HIRI导致的肝功能损害以及保护肝脏功能，愈来愈受到全球重视。探索防治HIRI的药物已成为当前研究热点。
　　 为了减轻肝脏缺血再灌注损伤，许多学者做了大量的研究，如缩短缺血时间、缺血预处理、缺血后处理及药物处理等，从而达到减轻肝细胞损伤的目的。药物处理是针对缺血再灌注的某个或某些机制利用药物的药理作用，减少再灌注损伤过程中产生的氧自由基、钙超载、炎性介质等或利用某些活性物质直接或间接的药理作用来增强肝组织或肝细胞对缺血再灌注损伤的耐受能力，减轻组织或细胞的损伤，从而达到保护的作用。促红细胞生成素（erythropoietin, EPO）由髓质与肾皮质交界处的球旁细胞合成的，能刺激骨髓造血的唾液糖蛋白类激素，促进红细胞的生成是其基本作用。
　　 EPO可通过与中枢神经系统、内皮细胞、实体肿瘤、子宫等多种非红系组织细胞表达的促红细胞生成素受体(erythropoietin recptor, EPOR)结合，形成EPO-EPOR信号传导系统，参与多种非造血生物活动，并对细胞和组织器官有保护作用。
　　 在肝脏疾病的治疗过程中，使用重组人红细胞生成素(recombinant humanerythropoietin, rHuEPO)治疗小鼠和大鼠，能够显著降低缺血再灌注所致损伤，包括肝脏组织病理学分数、酶学指标、细胞凋亡、有害细胞内信号转导和活性氧作用。研究表明，rHuEPO体内对缺血再灌注和其他原因引起的肝损伤保护，并不是直接作用于肝细胞，推测rHuEPO可能直接或间接地作用于非肝实质细胞如肝窦内皮细胞和kupffer细胞等减轻肝脏损伤。因此，值得深入探讨rHuEPO对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用和机制。
　　 本文采用大鼠自体肝移植动物模型，模拟肝移植过程中肝脏经历缺血再灌注损伤的过程，通过研究血清中肝脏酶学指标的变化，肝脏病理形态学改变，肝细胞凋亡等，观察rHuEPO预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。并结合调控细胞存活的关键信号通路-磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)信号通路的变化，探讨rHuEPO的作用机制，为研究rHuEPO预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用提供科学依据。
　　 第一部分、大鼠自体肝移植模型的建立情况
　　 目的：肝移植动物模型是肝移植实验研究的非常重要的基础。Kamada提出的“双套袖法”大鼠肝移植是目前应用较广泛且成熟的肝移植动物模型，但此模型不吻合肝动脉。而本中心建立的大鼠自体肝移植动物模型，能模拟临床肝移植过程，完全排除免疫、血管吻合等因素，全面反映肝脏缺血再灌注损伤的病理生理过程。现总结该动物模型建立情况以及术中、术后管理经验，以期该模型成功率高、重复性好。
　　 方法：
　　 1.实验动物SPF级纯系、雄性的SD大鼠55只，其中27只大鼠用于早期动物模型建立训练。另28只大鼠按照实验设计的要求和药物预处理的方案进行实验，其中假手术组(sham)3只，其余各组I/R，I/R+rHuEPO，I/R+DMSO，I/R+rHuEPO+LY294002，I/R+LY294002组，每组5只大鼠。
　　 2.手术操作经术前准备后，充分游离肝周结构，在使肝脏肝素化(含肝素37.5 U/ml)后，使用4℃含肝素（12.5 U/ml）的复方乳酸林格氏液经门静脉、腹主动脉双重恒压冷灌注。除冷灌注保存以及血管吻合操作外，其余方法同大鼠原位肝移植。
　　 3.观察时间及内容SD大鼠的观察的时间点分别为24 h，48 h，72 h，观察大鼠的生存质量和存活情况。
　　 4.统计方法运用SPSS13.0软件绘制生存曲线。
　　 结果：
　　 1.以肝素化大鼠时阻断门静脉到开始冷灌注为热缺血时间，到门静脉开放为无肝期。为标准化研究实验对象，其中热缺血时间为2.5-3.5min、冷灌注时间均统一为15min。将无肝期时间设定为30 min。
　　 2.在实验初期，大鼠存活满足实验设计要求达到92.31％。在研究实验药物对大鼠72 h生存率影响时，发现使用LY294002(PI3K特异性抑制剂)预处理组的存活率低。
　　 小结：
　　 自体移植的动物模型完全符合实验设计要求。手术操作时，应严格按照动物实验的基本原则，注意小细节处理，能显著改善大鼠术后恢复过程，甚至可以直接影响实验动物的存活。
　　 第二部分、rHuEPO预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用
　　 目的：建立的自体肝移植缺血再灌注损伤模型，从血清中肝脏酶学指标变化、肝脏病理形态改变和肝细胞凋亡三方面，初步探讨rHuEPO对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用。
　　 方法：
　　 1.建立自体肝移植的动物模型（同第一部分）。
　　 2.实验动物 SD大鼠随机60只，分成3组:①GroupⅠ:假手术组(Sham)20只。本组实验对象仅游离肝脏不给药。②GroupⅡ:缺血再灌注组(I/R)20只。术前30 min经尾静脉给予1ml0.9％生理盐水(normal saline，NS)。③GroupⅢ:rHuEPO预处理组(I/R+rHuEPO)20只。本组实验对象行自体原位肝移植手术。在术前30min，经尾静脉给予按照体重（Kg）×3000 U/kg的rHuEPO并将混合在0.9％NS中，容积为1ml。除Sham组外，所有大鼠行自体肝移植手术，均经历15min冷灌注时间，30 min的无肝期。
　　 3.标本的采集和处理按照肝脏再灌注后3h，6h，12h，24 h各时点每次处死5只大鼠。从IVC穿刺采集血标本4ml后注入血生化管中，室温血液自然凝固后离心，取上层血清标本冻存于-20℃备用。切取大鼠肝中叶部分作为标本检测，分别置液氮冻存和10％中性甲醛固定备用。
　　 4.观察指标血清酶学变化，病理形态学改变以及细胞凋亡指数。
　　 5.统计学分析计量资料用均数±标准差（(x)±s）表示，用SPSS13.0软件进行统计学分析，组均数间比较采用析因设计的方差分析，组间两两比较采用最小差异t检验(LSD-t)，若方差不齐，采用Dunnett's T3检验。P＜0.05认为差异有统计学意义。
　　 结果：
　　 1.血清酶学指标变化血清标本在再灌注后3h，6h，12 h及24 h各时间点取材，比较同一时间点血清ALT、AST及LDH水平差异。在同一时间点，各组动物血清中AST水平，差异无统计学意义（未标明具体数据）。但是血清ALT、LDH的变化差异，有统计学意义（P＜0.05）。大鼠经自体肝移植手术后，I/R组和rHuEPO预处理组(I/R+rHuEPO)的血清ALT、LDH水平均较假手术组(Sham)显著升高(P＜0.01)。I/R+rHuEPO组同I/R组比较，血清中ALT、LDH水平均显著降低，其差异具有统计学意义(P＜0.05)。此外，肝脏经历缺血再灌注后，血清ALT、LDH水平在再灌注后3h内迅速上升，于再灌注后6 h哒到较高水平后呈下降趋势，但至再灌注后24 h为止，血清中ALT、LDH水平均未恢复至正常水平，同Sham组比较差异具有统计学意义(P＜0.01)。
　　 2.组织形态学变化选取再灌注6h后的肝脏标本，作为观察对象。HE染色结果提示:假手术组(Sham)大鼠肝组织结构基本正常，肝窦排列整齐，未见中性粒细胞浸润。大鼠经历缺血再灌注损伤后6h，I/R组肝细胞肿胀，肝细胞边界不清，肝小叶中央静脉和肝血窦淤血明显，肝血窦狭窄，肝细胞索排列紊乱，肝细胞可见不同程度的水肿变性和空泡状变性，偶可见点状坏死，肝组织中有明显中性粒细胞的聚集、浸润，以中央静脉周围为甚。同Sham组比较，I/R组病理形态学评分高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。但是，经rHuEPO预处理的肝脏(I/R+rHuEPO)组织，肝小叶结构基本正常，小叶中央静脉、肝细胞索、肝血窦结构清晰，细胞变性不明显，中性粒细胞浸润减轻。
　　 3.肝细胞凋亡情况TUNEL法检测提示:肝脏缺血再灌注时组大鼠肝脏可见凋亡细胞。检测结果表明:缺血再灌注组(I/R)和I/R+rHuPO预处理组TUNEL阳性细胞较Sham组显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01);I/R+rHuPO预处理组TUNEL阳性细胞显著低于I/R组(P＜0.05);Sham组偶见阳性细胞。
　　 小结：
　　 本部分以SD大鼠为实验动物，运用大鼠自体肝移植模型模拟肝脏缺血再灌注损伤。通过检测血清酶学指标、组织病理学及细胞凋亡指数的变化证实了该模型能够反应缺血再灌注损伤的病理生理过程。rHuEPO预处理能够降低血清酶学指标，改善肝脏组织形态，具有减轻缺血再灌注导致的损伤，对大鼠肝脏缺血再灌注损伤有保护作用。
　　 第三部分、PI3K/AKT信号通路在rHuEPO预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤保护中的作用
　　 目的：在第二部分实验的基础上，实验拟利用大鼠自体肝移植的模型及PI3K特异性抑制剂LY294002，通过检测血清酶学指标的变化，肝脏病理形态改变和AKT蛋白的激活情况，探讨PI3K/AKT信号通路是否参与rHuEPO预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。
　　 方法：
　　 1.自体肝移植动物模型的建立（同第一部分）。
　　 2.实验动物①GroupⅠ: Sham组;②GroupⅡ:缺血再灌注组(I/R);③GroupⅢ: rHuEPO预处理组（I/R+rHuEPO），上述三组第二部分实验已完成，本部分一并纳入分析。本部分实验采用60只SD大鼠，随机分入下列组别:④GroupⅣ: I/R+DMSO组(20只)，术前30 min，经尾静脉给予1ml2％(v/v)DMSO;⑤GroupⅤ: I/R+LY294002组（20只），术前60 min，按照1 mg/kg的LY294002将其溶解于1ml2％(v/v) DMSO中经尾静脉给药;⑥GroupⅥ:I/R+rHuEPO+LY294002组(20只)，术前60 min，按照1 mg/kg的LY294002将其溶解于0.5 ml2％(v/v) DMSO中经尾静脉给药，术前30 min再按照体重(Kg)×3000U/kg rHuEPO并将混合在0.5ml的0.9％ NS中，经尾静脉再次给药。上述各组动物，均行自体肝移植手术。
　　 3.标本的采集和保存（同第二部分实验）。
　　 4.观察血清酶学的指标检查，肝脏组织形态学评分（同第二部分实验）。
　　 5.Western Blot检测rHuEPO和LY294002单独及联合预处理对总AKT和磷酸化AKTSer473蛋白表达的影响。
　　 6.统计学分析分析方法（同第二部分实验）。
　　 结果：
　　 1.PI3K抑制剂LY294002预处理组对肝脏酶学指标的影响在肝脏再灌注（无肝期结束开始计时）3h，6h，12 h及24 h各时间点，I/R组，I/R+LY2940002组，Sham组，I/R+DMSO血清ALT、LDH水平均有差异，且有统计学意义(P＜0.01)。自体肝移植大鼠在经历缺血再灌注损伤后，其血清中ALT、LDH均较Sham组显著升高，差异有统计学意义(P＜0.01)。其中I/R+DMSO组同I/组比较，结果显示两组SD大鼠在经历肝脏缺血再灌注损伤后，其血清中ALT、LDH的变化均无显著的统计学差异(P＞0.05)。但是I/R+LY294002组，血清ALT、LDH水平在肝脏再灌注后上述时间点较I/组和I/R+DMSO组均显著升高，其差异有统计学意义(P＜0.05)。此外，I/R+LY294002组SD大鼠经历缺血再灌注后，血清ALT、LDH水平在再灌注后3h内迅速上升，其后上升趋势变缓，血清ALT、LDH水平于再灌注后6 h哒到较高水平后逐渐下降，但至再灌注24 h为止，血清ALT、LDH水平均未恢复至正常水平，同Sham组比较差异具有统计学意义(P＜0.01)。
　　 2.药物预处理对肝脏组织形态学的影响为了进一步观察PI3K抑制剂LY294002预处理对肝脏缺血再灌注的作用，我们对复灌后6h各组大鼠肝脏的组织形态学变化进行量化比较。再灌注后6h，在I/R+DMSO组，肝细胞肿胀，肝窦内淤血及少量炎性细胞浸润。LY294002预处理组(I/R+LY294002)大鼠病理学检查可见肝细胞索结构明显破坏、大量的肝细胞变性、溶解，其病理损伤评分较高。在灌注后6h，同I/R+DMSO组，I/R+LY294002+rHuEPO组比较，I/R+LY294002组组织病理学评分高，差异具有统计学意义。但LY294002+rHuEPO联合预处理的SD大鼠，灌注结束后6h，少量坏死肝细胞形态不可辨别，细胞崩解、坏死，细胞核分解。综合分析实验各组(Sham、I/R、I/R+DMSO、I/R+LY29400、I/R+rHuEPO、I/R+LY294002+rHuEPO)的组织病理学染色结果:在肝脏灌注结束后6h，使用LY294002预处理，反而加重了肝脏缺血再灌注后肝脏组织结构的破坏，而联合使用rHuEPO预处理后，肝脏病理损伤有所减轻。rHuEPO预处理组病理损伤评分低，提示其对肝脏的组织形态有保护作用。
　　 3.rHuEPO联合LY294002预处理对肝缺血再灌注损伤的影响在实验设计中，将rHuEPO和LY294002联合使用对自体肝移植大鼠进行预处理。研究发现在再灌注后同一时点，I/R+rHuEPO+LY294002组同I/R+rHuEPO组比较，血清ALT、LDH水平显著升高，其差异具有统计学意义(P＜0.05)。但是IR+rHuEPO+LY294002组与I/R+LY294002组比较时，发现血清ALT、LDH水平在HuEPO联合LY294002预处理组有所降低，其差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 4.药物预处理对总AKT和磷酸化AKTser473蛋白表达的影响以相应蛋白条带平均光强度值来表示AKT和p-AKT活化水平的相对强度。通过p-AKT ser473/β-actin和AKT/β-actin平均光强度值的比值，反映PI3K/AKT信号通路的活化情况。肝脏灌注结束后6h，Sham、I/R、I/R+DMSO、I/R+LY29400、I/R+rHuEPO、I/R+LY294002+rHuEPO，各组总AKT表达的差异无统计学意义（P＞0.05）。但是各组磷酸化AKTser473和总AKT(p-AKTser473/AKT)进行比较，发现肝脏经历缺血再灌注损伤后，p-AKTser473磷酸化水平增高，同sham组比较，其差异具有统计学意义(P＜0.05)。与I/R组比较，rHuEPO预处理组磷酸化AKTser473的增高有统计学意义（P＜0.05）。LY294002预处理组同I/R组比较，其磷酸化的AKTser473水平，显著降低，提示LY294002预处理能够抑制缺血再灌注以及rHuEPO预处理诱导肝组织中的磷酸化AKTser473蛋白增高。
　　 小结：
　　 1.通过蛋白质印迹技术发现，rHuEPO预处理诱导磷酸化AKT ser473表达增加与rHuEPO预处理引起的组织病理学损伤，肝脏酶学的释放显著减少相一致。
　　 2.P13K阻断剂LY294002显著抑制了rHuEPO预处理诱导磷酸化AKTser473表达的增加和对肝脏的保护。rHuEPO联合LY294002预处理，能减轻LY294002预处理对肝脏缺血再灌注的损伤。
　　 3.进一步支持P13K/AKT信号通路的激活介导了rHuEPO预处理的肝脏保护作用。肝脏组织中磷酸化AKTser473、总AKT的蛋白表达的变化证实了rHuEPO预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用有PI3K/AKT细胞信号通路参与。
　　 第四部分、eNOS在rHuEPO预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤保护中的作用
　　 目的：本部分实验通过检测肝脏组织标本中总eNOS、磷酸化eNOS Ser1177的蛋白表达，eNOS mRNA、EPOR mRNA的变化，以及血清中NO和ET-1含量变化，探讨PI3K/AKT/eNOS细胞信号通路参与rHuEPO预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护的作用机制。
　　 方法：
　　 1.收集肝脏组织标本和血清样本（第二、三部分实验保存）。
　　 2.实时荧光定量PCR检测eNOS mRNA，EPOR mRNA表达。
　　 3.Western Blot检测肝脏组织中总eNOS和p-eNOS Ser1177的蛋白表达。
　　 4.硝酸盐还原酶法测定大鼠血清样本中NO含量。
　　 5.酶联免疫吸附法测定大鼠血清样本中ET-1含量。
　　 6.统计学分析分析方法（同第二部分实验）。
　　 结果：
　　 1.rHuEPO预处理对肝脏组织中eNOS mRNA含量的影响肝脏再灌注后6h，与假手术组(Sham)比较，经历缺血再灌注损伤各组肝脏组织内eNOS mRNA含量显著增高，其差异具有统计学意义（P＜0.05）。同其I/R，I/R+DMSO和I/R+LY294002组比较，I/R+rHuEPO预处理组肝脏组织内eNOSmRNA含量显著增高，其差异具有统计学意义（P＜0.05）。但是肝脏组织内eNOSmRNA含量在I/R+rHuEPO和I/R+LY294002+rHuEPO组，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 2.rHuEPO预处理对肝脏组织中EROPmRNA含量的影响实时荧光定量PCR结果提示:与假手术组(Sham)比较，缺血再灌注6h后的肝脏组织内EPOR mRNA均显著升高，其差异有统计学意义(P＜0.05)，提示缺血再灌注能够增加肝脏组织中EPOR mRNA含量。同各组缺血再灌注比较，rHuEPO预处理组(I/R+rHuEPO)并不能增加肝脏组织内EPOR mRNA含量。使用PI3K抑制剂LY294002预处理亦不能增加或减少肝脏组织内EPOR mRNA含量。
　　 3.药物预处理对总eNOS，磷酸化eNOS Ser1177蛋白表达的影响通过免疫印迹分析比较缺血再灌注6h后的肝脏组织中eNOS蛋白和p-eNOSSer1177的变化，以各组磷酸化eNOS Ser1177/β-actin与总eNOS/β-actin的比值进行比较。研究发现各组间总eNOS蛋白表达的差异无统计学意义(P＞0.05)。磷酸化eNOS Ser1177在假手术组(Sham)中有较少的表达。但同I/R组比较，在rHuEPO预处理组使肝脏磷酸化eNOS Ser1177增加，其差异具有统计学意义(P＜0.05)。但是在使用PI3K特异性抑制剂LY294002预处理，磷酸化eNOS Ser1177的表达并没有增加。联合使用rHuEPO和LY294002预处理发现，rHuEPO预处理能改善LY294002对p-eNOS Ser1177的抑制。p-eNOS Ser1177在缺血再灌注各组中的变化趋势同AKT及磷酸化AKTser473的趋势一致。rHuEPO预处理能够激活肝脏组织中磷酸化的AKT ser473和eNOS Ser1177蛋白表达增加。
　　 4.rHuEPO预处理对大鼠血清中NO含量的影响用硝酸酶还原法进行检查肝脏灌注后3h，6h，12h，24 h血清样本中NO含量的变化。与假手术组(Sham)比较，经历缺血再灌注各组血清内NO含量减少，其差异具有统计学意义(P＜0.05)。在同一时间点，rHuEPO预处理组血清中NO含量显著增加。I/R+LY294002组的血清NO含量显著降低，同其他各组（Sham，I/R，I/R+DMSO，I/R+rHuEPO）比较差异具有统计学意义。在缺血再灌注6h后，经历缺血再灌注的各组大鼠的血清NO含量较低。这一变化趋势与肝脏酶学指标的释放，组织病理形态学的改变相一致。随着时间的推移，大鼠血清NO水平逐渐升高，rHuEPO预处理组的血清NO水平，在灌注24 h后，与假手术组的大鼠血清NO水平基本接近。
　　 5.rHuEPO预处理对大鼠血清中ET-1含量的影响用ELASA法进行检查肝脏灌注后3h，6h，12 h，24 h血清样本中ET-1含量的变化。与假手术组比较，缺血再灌注损伤组血清内ET-1含量显著增加（P＜0.05）。在同一时间点，rHuEPO预处理组降低了血清中ET-1含量。I/R+LY294002组的血清ET-1含量显著升高，同其他各组（Sham，I/R，I/R+DMSO，I/R+rHuEPO）比较差异具有统计学意义。在缺血再灌注3h，经历缺血再灌注的各组大鼠的血清ET-1含量较高，随着时间的推移，大鼠血清ET-1水平逐渐降低，rHuEPO预处理组的血清ET-1水平，再灌注24 h后，与假手术组血清ET-1水平基本接近。
　　 小结：
　　 1.rHuEPO预处理并不能增加肝脏组织内EPOR mRNA含量，但能增加肝脏组织内eNOS mRNA含量。LY294002预处理组对EPOR mRNA含量无影响。
　　 2.rHuEPO预处理增加肝脏组织p-eNOSser1177蛋白的表达，LY294002预处理组抑制了p-eNOSser1177蛋白的表达，与AKT及p-AKTser473的趋势一致，提示PI3K/AKT/eNOS细胞信号通路参与了rHuEPO对肝脏缺血再灌注损伤的保护。
　　 3.当肝脏经历缺血再灌注损伤后，其血清中NO和ET-1之间的平衡关系被破坏。rHuEPO预处理组能够显著增加血清NO的水平，调节血清中NO和ET-1间的平衡，证实了rHuEPO预处理通过激活p-eNOSser1177表达和增加NO的释放，减轻肝脏缺血再灌注导致的损伤。
　　 结论：
　　 1.自体肝移植的动物模型，能够模拟肝缺血再灌注损伤的病理生理过程。肝脏经历缺血再灌注后，血清酶学指标(ALT、LDH)显著升高，肝组织结构发生形态学改变，肝细胞有坏死和凋亡的发生。
　　 2.rHuEPO预处理可显著抑制肝脏缺血再灌注损伤导致的血清中ALT、LDH水平的升高，改善肝脏组织形态学损伤，抑制肝细胞凋亡，减轻肝脏的病理损伤。
　　 3.LY294002预处理显著抑制了rHuEPO预处理诱导p-AKTSer473表达的增加和对肝脏的保护。提示rHuEPO预处理可能通过激活PI3K/AKT细胞信号通路发挥对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。
　　 4.LY294002预处理显著抑制了rHuEPO预处理诱导p-eNOSser1177表达的增加。提示rHuEPO预处理可能通过激活PI3K/AKT/eNOS细胞信号通路发挥对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。
　　 5.rHuEPO预处理通过激活肝脏组织p-eNOSser1177，调节血清中NO与ET-1之间的平衡，发挥对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。

目录

摘要

前言

第—部分 大鼠自体肝移植模型的建立情况

1．实验材料

2．实验方法

3．实验结果

4．讨论

参考文献

第二部分 rHuEPO预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤的保护作用

1．实验材料

2．实验方法

3．实验结果

4．讨论

参考文献

第三部分 P13K／AKT信号通路在rHuEPO预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤保护中的作用

1．实验材料

2．实验方法

3．实验结果

4．讨论

参考文献

第四部分 eNOS在rHuEPO预处理对大鼠自体肝移植缺血再灌注损伤保护中的作用

1．实验材料

2．实验方法

3．实验结果

4．讨论

参考文献

结论

缩略词中英文对照表

攻读学位期间成果

致谢

声明

统计学证明