海带多糖对慢性肾功能衰竭及并发性血管钙化的干预作用

摘要

海带多糖是存在于海带细胞中的一类天然生物大分子物质，表现出多种生物活性。本文主要开展了海带多糖(LJP61A)对腺嘌呤诱发的小鼠慢性肾功能衰竭及并发性血管钙化的干预效果研究，并通过离体钙化模型对体内实验进行验证并探索LJP61A对血管平滑肌细胞钙化形成的干预机制，现取得的研究结果如下：
　　(1)海带多糖LJP61A对小鼠慢性肾功能衰竭的干预作用研究:采用腺嘌呤诱导的小鼠慢性肾功能衰竭实验模型，通过检测小鼠体重、肾脏病理损伤及血清和尿液各项生化指标，探究LJP61A对肾功能衰竭是否存在干预作用。组织病理学研究显示，LJP61A对肾脏代偿性纤维化增生和肾小管损伤有一定的保护作用，呈量效关系。血清和尿液生化检测结果显示LJP61A可显著降低慢性肾功能衰竭小鼠血清BUN、Crea水平，改善Ca2+、Mg2+、P3+等电解质及蛋白质代谢紊乱状态，稳定肾功能，表明LJP61A能显著延缓腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭病情的发展进程。
　　(2)海带多糖LJP61A对慢性肾功能衰竭小鼠并发性血管钙化的干预作用研究:通过复制慢性肾功能衰竭钙磷代谢紊乱引起的血管钙化的同时给予LJP61A干预，病理检测结果显示LJP61A能明显降低主动脉钙和磷含量、ALP活性水平以及血清中PTH和FGF-23的含量;形态学研究和免疫组织化学分析结果显示，海带多糖能够降低血管钙化形成过程中的主动脉钙磷盐沉积现象，并上调平滑肌细胞上钙敏感受体的表达;qRT-PCR和Western blotting结果显示，LJP61A能显著上调主动脉组织中血管平滑肌细胞标志因子α-SMA、SM22α的基因表达以及降低Pit-1的基因表达，促进钙化抑制因子MGP和OPG的蛋白表达，并且显著降低骨分化相关蛋白Cbfa-1、OC、RANKL、BMP-2的表达。结果表明海带多糖LJP61A对腺嘌呤诱发的慢性肾功能衰竭并发性血管钙化的发生有较强的干预作用。
　　(3)海带多糖LJP61A对β-GP诱导的小鼠血管平滑肌细胞钙化的干预作用初探:采用β-GP诱导MOVAS细胞钙化模型，当LJP61A在浓度为25μg/mL时，明显减少细胞内的钙化结节及ALP的分泌。qRT-PCR结果显示，LJP61A能够上调β-GP诱导的MOVAS细胞中MGP、OPN、α-SMA、SM22α的转录表达水平以及降低Pit-1的基因表达。Western blotting结果显示，LJP61A能够抑制内源性钙化促进因子Cbfa-1、OC、BMP-2和RANKL蛋白表达，并且显著上调钙化抑制因子OPG和MGP蛋白表达。综上结果表明，LJP61A通过细胞内钙化促进及抑制因子平衡的调节从而抑制血管重塑过程中平滑肌细胞转分化为类成骨细胞的过程。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 绪论

1．1 慢性肾功能衰竭及并发性血管钙化的研究概况

1．1．1 慢性肾功能衰竭的研究进展

1．1．2 血管钙化的研究进展

1．2 慢性肾功能衰竭患者血管钙化的中西医治疗进展

1．2．1 慢性肾功能衰竭患者血管钙化的中医治疗

1．2．2 慢性肾功能衰竭患者血管钙化的西医治疗

1．3 海带多糖的活性研究进展

1．4 论文研究内容及主要技术路线

1．4．1 研究主要内容

1．4．2 研究技术路线如下图

第二章 材料与方法

2．1 实验材料及动物

2．2 主要试剂

2．3 主要仪器

2．4 实验方法

2．4．1 海带多糖的提取

2．4．2 海带多糖的分离纯化

2．4．3 海带多糖LJP61A对小鼠慢性肾功能衰竭及并发性血管钙化的干预作用

2．4．4 海带多糖LJP61A对β-GP诱导的小鼠血管平滑肌细胞(MOVAS-1)钙化的干预作用初探

2．5 数据处理

第三章 结果与分析

3．1 LJP61A对小鼠慢性肾功能衰竭的干预作用

3．1．1 各剂量LJP61A对小鼠体重的影响

3．1．2 各剂量LJP61A对小鼠水和食物摄入量水平的变化的影响

3．1．3 小鼠肾脏组织形态学观察与检测

3．1．4 小鼠血清各项生化指标及电解质指标的检测

3．1．5 小鼠尿液各项生化指标的检测

3．3 LJP61A对慢性肾功能衰竭小鼠并发性血管钙化的影响

3．3．1 小鼠主动脉组织病理学研究

3．3．2 各剂量LJP61A对主动脉钙和磷含量的影响

3．3．3 各剂量LJP61A对主动脉碱性磷酸酶(ALP)的活性的影响

3．3．4 各剂量LJP61A对血清中PTH和FGF-23含量的影响

3．3．5 各剂量LJP61A对血管平滑肌细胞标志基因与钙化标志基因的表达的影响

3．3．6 各剂量LJP61A对主动脉成骨细胞表型标志分子的表达的影响

3．4 LJP61A对β-GP诱导的小鼠血管平滑肌细胞钙化的干预作用

3．4．1 LJP61A对MOVAS细胞增殖的影响

3．4．2 LJP61A对β-GP诱导的MOVAS细胞钙化水平的影响

3．4．3 LJP61A对β-GP诱导的MOVAS细胞内碱性磷酸酶活性的影响

3．4．4 LJP61A对β-GP诱导的MOVAS细胞MGP、OPN、Pit-1、α-SMA、SM22α mRNA表达的影响

3．4．5 LJP61A对β-GP诱导的MOVAS细胞钙化标志蛋白表达的影响

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况