重楼皂苷I对高转移人卵巢癌细胞体外生长抑制及抗转移功能研究

摘要

重楼（Rhizoma Paridis）为百合科重楼或七叶一支花的根茎，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效。现代药理研究表明该药具有止血、抗肿瘤、免疫调节、心血管作用等广泛的药理活性。许多学者在重楼的抗肿瘤研究中发现重楼皂苷和重楼提取物在体内外实验中显示出明显的抑瘤作用。　　目的：研究重楼提取的活性成分重楼皂苷I对高转移人卵巢癌细胞的体外生长抑制及抗转移功能，并初步探讨其可能的作用机制。　　方法：用 CCK8法检测不同浓度重楼皂苷 I在不同时间点对高转移人卵巢癌细胞（HO-8910PM）体外增殖的影响；光镜下观察细胞形态的变化；用流式细胞术（FCM）检测经不同浓度重楼皂苷I处理后高转移人卵巢癌细胞的细胞周期变化；用AnnexinV/PI双染法、Hoechst33258检测不同浓度重楼皂苷I诱导细胞凋亡的发生；选用Transwell小室侵袭实验观察不同浓度重楼皂苷 I对高转移人卵巢癌细胞转移能力的影响；利用RT-PCR检测与转移相关基因MMP9、uPA的表达。　　结果：重楼皂苷I在0.5～5μg/ml浓度范围对HO-8910PM细胞的增殖均有明显抑制作用，并呈现明显的剂量-时间依赖性。其半数抑制浓度在24小时到120小时范围内基本集中在1～3.5μg/ml之间；重楼皂苷I主要影响HO-8910PM细胞的DNA合成前期（G0/G1）；重楼皂苷I浓度控制在2μg/ml以内，早期即3小时开始就能诱导HO-8910PM细胞的凋亡，作用时间越长，凋亡发生率越高；重楼皂苷I可以抑制HO-8910PM细胞的转移能力，通过RT-PCR检测其抑制转移的机制可能是通过降低uPA基因表达来实现。　　结论：重楼皂苷I能抑制卵巢癌细胞的增殖并诱导其凋亡；同时通过降低uPA基因的表达抑制其转移能力，从而发挥抗肿瘤作用。

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前言

一、材料和方法

（一）实验材料

1．实验细胞

2．实验药品

3. 主要实验试剂

4. 主要实验设备与仪器

（二）实验方法

1．重楼皂苷I对HO-8910PM细胞的体外生长抑制作用

2．重楼皂苷I对HO-8910PM细胞周期影响

3．重楼皂苷I诱导HO-8910PM细胞凋亡实验

4．重楼皂苷I对HO-8910PM细胞转移能力的影响（Transwell小室侵袭实验）

5．重楼皂苷I对转移相关基因MMP9mRNA、uPAmRNA 表达的影响

（三）统计学处理

二、结 果

（一）重楼皂苷I作用于HO-8910PM细胞的形态学变化

（二）重楼皂苷I对HO-8910PM细胞的体外生长抑制作用

（三）重楼皂苷I对HO-8910PM细胞周期影响

（四）重楼皂苷I诱导HO-8910PM细胞凋亡实验

（五）重楼皂苷I对HO-8910PM细胞转移能力的影响

（六）重楼皂苷I对转移相关基因MMP9mRNA、uPAmRNA 表达的影响

三、分析与讨论

结论

参考文献

附图

文献综述