大黄素对TLR4基因介导的肾小管上皮细胞LPS信号转导的机理研究

摘要

目的:观察在脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导下，肾小管上皮细胞对天然免疫Toll样受体4（Toll-like receptor4 TLR4）和信号转导分子髓样分化因子88（Myeloid differentiation factor88,MyD88）、核转录因子κB( Nuclear factor－kappa B,NF-κB)以及下游产物白细胞介素6（Interleukin－6，IL-6）、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα，TNFα)的反应，阐述在肾固有细胞中存在与其它炎症细胞相同的信号转导途径，进一步证实肾固有细胞参与肾脏免疫过程；同时探讨大黄素在上述环节中的作用及途径。　　方法:原代培养的BALB/C小鼠肾小管上皮细胞，模型组用100ng/ml的LPS诱导，治疗组在LPS诱导的同时，分别用0.1、0.2、0.4μg/ml浓度的大黄素干预，于24h后分别提取细胞总RNA及蛋白，用逆转录－聚合酶链反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction，PT-PCR）检测TLR4、MyD88、NF-ΚB以及TNFα、IL-6 mRNA的表达，并用免疫蛋白印迹（Western-blotting）检测肾小管上皮细胞NF-κB蛋白的表达。　　结果:正常肾小管上皮细胞可见TLR4、MyD88、NF-κB以及TNFα、IL-6 mRNA低表达，用LPS刺激后，各因子表达均明显上调（与正常组比，P<0.05）,不同浓度大黄素干预后则TLR4、MyD88、NF-κB以及TNFα、IL-6 mRNA表达均明显下降（与模型组比较，P<0.05），下降程度与大黄素浓度相关，部分存在一定的量效依赖关系；Western-blotting法显示LPS诱导后，转入核内的NF-κB明显增加（P<0.01），而大黄素干预后则活性NF-κB显著减少（P<0.05）。　　结论:肾小管上皮细胞本身能够表达TLR4、MyD88、NF-ΚB以及TNFα、IL-6；通过TLR4介导，LPS可以诱导NF-ΚB活化，引起促炎症细胞因子基因的转录，导致TNFα、IL-6失控性表达，产生相关的免疫炎症反应；大黄素能够抑制TLR4基因介导的肾小管上皮细胞LPS信号转导，减轻肾脏局部免疫炎症反应、保护肾功能。

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中文摘要

英文摘要

前言

一、材料与方法

（一）实验材料

（二）实验方法

二、实验结果

（一）肾小管上皮细胞形态

（二）LDH释放试验检测大黄素对肾小管上皮细胞的毒性作用

（三）不同浓度LPS刺激对肾小管上皮细胞NF-κB的诱导

（四）大黄素对LPS刺激的肾小管上皮细胞TLR4、MyD88、NF-κB、TNFα及IL-6表达的影响

（五） Western-blottng法检测NF-κB的活性变化

三、分析与讨论

（一）LPS与肾小管上皮细胞炎症模型的制备

（二）TLR4信号转导与肾小管上皮细胞炎症损伤

(三) 大黄素对TLR4基因介导的肾小管上皮细胞LPS信号转导的的影响

（四）大黄素在慢性肾脏疾病治疗中的作用机理探讨

四、小结

结论

参考文献

附图

致谢

附：文献综述:NF-κB抑制物的研究进展